武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长
cAMP antibody
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。

试剂准备
非乙酰化cGMP标准品将5000 pmol/mL cGMP标准品溶液平衡至室温。从#1至#7标记六只洁净试管。移取475μL 0.1M HCl到#1号试管,400μL到#2至#7号试管。加入25μL 5000 pmol/mL cGMP标准品到#1管中,剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μL溶液至#2管中,涡旋震荡。以此类推,重复上步操作,梯度稀释至#7管。
经以上操作,#1至#6管中cGMP标准品浓度分别为250,50,10,2,0.4,0.08和0.016 pmol/mL(详见cGMP加样表)。稀释过的标准品需在30分钟内使用。
标记一只试管作为无标准品空白对照(NSB)。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。
洗涤液将15 mL 10×洗涤液储液加到135 mL去离子水中,稀释成工作液。稀释液可在室温保存至试剂盒有效期限,或者3个月。
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等。
酶标记抗l体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗l体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗l体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。
体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意:在细胞体内环境条件下大约有10%的Ras被激l活,而在体外用GTPγS处理大约有90%的Ras被激l活。
1.
准备两个离心管,每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物(如果是纯的Ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug)。
2.
每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。
3.
一个管中加入5ul的100X GTPγS(终浓度即为100 uM)作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP(终浓度即为1 mM)作为阴性对照。
4.
将离心管置于30°C条件下反应30 min并不断搅动。
5.
终止反应:将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。
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