检测原理
武汉纽斯特生物技术有限公司的Cdc42活性检测试剂盒主要是利用识别蛋白特异形态的Cdc42-GTP单克l隆抗l体特异性的去检测细胞提取物或者体外的(样品需要进行GTPγS活化处理)活性Cdc42-GTP的水平。简言之,特异性识别Cdc42活化构象的鼠单克l隆抗l体可以特异性结合细胞裂解液中的Cdc42-GTP活性蛋白,然后利用pr
Rab11-GTP
检测原理
武汉纽斯特生物技术有限公司的Cdc42活性检测试剂盒主要是利用识别蛋白特异形态的Cdc42-GTP单克l隆抗l体特异性的去检测细胞提取物或者体外的(样品需要进行GTPγS活化处理)活性Cdc42-GTP的水平。简言之,特异性识别Cdc42活化构象的鼠单克l隆抗l体可以特异性结合细胞裂解液中的Cdc42-GTP活性蛋白,然后利用protein A/G将抗原抗l体的结合物吸附下来,再利用特异性识别Cdc42活化构象的兔多克l隆抗l体进行免l疫印迹分析进行检测。
电泳和转移
1向聚丙l烯酰胺凝胶(17%)中加入15μL/孔的下拉上清液。而且
建议包括预染色MW标准(作为成功转入的指标步骤3)。
2按照制造商的说明进行SDS-PAGE。
3按照制造商的说明,将凝胶蛋白转移到PVDF或硝化纤维膜上
说明。
免l疫印迹检测(所有步骤均在室温下搅拌)
1在电印迹步骤之后,将PVDF膜浸入甲l醇中15次
然后在室温下干燥5分钟。
如果使用硝基纤维素,则应跳过此步骤。
2室温下用5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白在TBST中封闭1小时
不断地搅动。
用抗Arl1单克l隆抗l体孵育,新鲜稀释1:50~1000
(取决于样品中Arl1蛋白质的含量)5%脱脂奶粉或3%
BSA/TBST,室温下持续搅拌1-2小时或4o
过夜。
3用TBST清洗吸水膜三次,每次5分钟。
4用二级抗l体(例如山羊抗鼠IgG,HRP结合物)培养膜,
在室温下,在5%脱脂奶粉或3%BSA/TBST中新鲜稀释1:1000,1小时
5用TBST清洗吸水膜三次,每次5分钟。
6使用您选择的检测方法,如ECL。
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