测定步骤
I.主动Arf 6下拉分析
1.将0.5 – 1 mL细胞裂解液等分到微量离心管中。
2.使用1X分析/裂解缓冲液将每个样品的体积调整为1 mL。
3.在管中加入1 μl抗活性Arf 6单克l隆抗l体。
4.通过涡旋或滴定重悬蛋白A / G琼脂糖珠浆。
5.向每个管中添加20 μL重悬浮的珠浆。
G蛋白活性检测试剂盒
测定步骤
I.主动Arf 6下拉分析
1.将0.5 – 1 mL细胞裂解液等分到微量离心管中。
2.使用1X分析/裂解缓冲液将每个样品的体积调整为1 mL。
3.在管中加入1 μl抗活性Arf 6单克l隆抗l体。
4.通过涡旋或滴定重悬蛋白A / G琼脂糖珠浆。
5.向每个管中添加20 μL重悬浮的珠浆。
6.轻轻搅拌将试管在4°C下孵育1小时。
7.通过以5,000 x g离心1分钟来沉淀小珠。
8.吸出并丢弃上清液,确保不要干扰/除去珠粒。
9.用0.5 mL的1X Assay / Lysis Buffer洗涤磁珠3次,每次离心并吸出。
10.后一次洗涤后,将珠粒沉淀并小心除去所有上清液。
11.将磁珠沉淀重悬于20 μL 2X还原SDS-PAGE样品缓冲液中。
12.将每个样品煮沸5分钟。
13.以5,000 x g的速度离心每个样品10秒钟。
Arl3(类似Arf的3)是一种ADP-核糖基化因子(Arf)家族蛋白,在N端延伸方面不同于大多数Arf家族成员。 Arl3的核苷酸交换是的,并且与脂质和去污剂无关。 与GDT / GTP结合后,Arl3与一系列效应蛋白相互作用,并调节这些效应蛋白的活性,例如人类视网l膜基因4(HRG4),cGMP磷酸二酯酶的δ亚基(PDEδ)和Arl2的结合物(BART)。 Arl3还以可调节的方式结合微管,以通过与色素性视网l膜炎2(RP2)相互作用来改变胞质分裂的特定方面。 有人提出,RP2与Arl3协同作用,将光感受器中的细胞膜和细胞骨架连接为细胞的一部分
9.收集上清液并在冰上存储样品(约1-2 mg总蛋白)以进行中间使用,或将其冷冻并保存在-70°C下以备将来使用。
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。
在G蛋白的四个亚家族中,G12/13亚家族的功能尚不清楚。在
这个家族,有两个成员,G12和G13,它们普遍表达。Gα12基因敲除小鼠看上去很正常。Gα13基因敲除小鼠表现出胚胎致死性(~E9.5)。Gα13-/-老鼠胚胎的血管系统有缺陷。G13对受体酪氨酸激酶的诱导也是必不可少的成纤维细胞和内皮细胞的迁移。
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