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多肽的分离制备,如何上量？如何增大分离度

反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。

关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6mm内径）上做一下实验,找到很大的分离度,这一过程的难度是很大的,要不断地改变流动相和固定相,然后再线性或非线性放大到制备,放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。

还可以考虑离子交换来分l离。

制备柱跑干了影响柱效吗

如果时间不长的话，可以用流动相多冲几个小时，柱效不一定变化很大。如果时间太久，柱效一定变低，具体造成影响有多大，要靠柱效测定来确定，而不是干柱时间的长短。如果跑干了，对于PUMP的影响可能还大些，所以尽量先把管路中的空气抽走再说。

一般说来，制备柱子跑干，属于操作失当。柱子闲置不用时，尽量冲入甲醇或其他有机的溶剂，一定要把两头堵住密封，这样保留的时间会较长。

同一种填料的分析柱、制备柱按线形放大公式套，分离度会不会变化？

一般会有一定的变化，原因有以下几点：

（1）制备柱的装填是否均匀，如不均匀则可能产生涡流扩散使各个组分的经过通道的直径不同、阻力不一样，停留时间不同，色谱峰可能变宽。

（2）如果样品在流动相中溶解度小，在制备色谱上会有不同的峰展宽。

（3）如果样品在分析柱上有展宽或拖尾的现象，放大到制备柱上后峰的展宽和拖尾经常会非常严重，导致分离失败。

　制备色谱仪分类有多种　　

1、按流动相物理状态可分：制备型气相色谱仪、制备型液相色谱仪和制备型超临界流体色谱仪。　　

2、按分离模型可分：制备型线性色谱仪和制备型非线性色谱仪。　　

3、按分离对象的属性可分：制备型有机色谱仪和制备型无机色谱仪。　　

4、按固定相物理状态可分：制备型气液色谱仪、制备型气固色谱仪、制备型液液色谱仪和制备型液固色谱仪。　　

5、按用途可分：制备型生物色谱仪、制备型制药色谱仪、制备型化工色谱仪、制备型食品色谱仪、制备型菌体色谱仪等。