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泵用后不能及时清洗移动相中不得含有腐蚀性物质,含有缓冲液的流动相不能留在泵中,特别是当泵停泵过夜或更久时。若含有缓冲液的流动相留在泵中,可能会析出盐的微晶,如上述固体颗粒那样损坏密封环和柱塞,甚至只是因为溶液处于静止状态时,会析出。所以,必须用纯水将泵完全清洗干净,然后转换成适合于保存色
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泵用后不能及时清洗移动相中不得含有腐蚀性物质,含有缓冲液的流动相不能留在泵中,特别是当泵停泵过夜或更久时。若含有缓冲液的流动相留在泵中,可能会析出盐的微晶,如上述固体颗粒那样损坏密封环和柱塞,甚至只是因为溶液处于静止状态时,会析出。所以,必须用纯水将泵完全清洗干净,然后转换成适合于保存色谱柱和有利于泵维护的溶剂(对于反相键合硅胶固定相,可能是或-水)流相去空水泵工作时要注意防止溶剂瓶内的流动相被用完,否则泵运转也会磨损柱塞、气缸或密封环,终造成泄漏。如果没有流动相的外流,没有压力指示怎么办?也许是泵内有大量的气体,此时可开启泄压阀,使泵在较大流量(如5 ml/min)下运转,排出气泡,也可用一个50 ml的针筒在泵出口协助抽气。另外一个可能的原因是密封环磨损需要更换。
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不稳定的压力和流量其原因可能是需要排除的气泡;或单向阀内有异物,可卸下单向阀,浸入内超声清洗。有时候可以是砂滤棒内部出现气泡,或者被细小盐粒或滋生微生物部分堵塞,此时,可卸下砂滤棒浸入流动相超声除气泡,或将砂滤棒浸入稀酸(如4 mol/L)中迅速除去微生物,或将盐溶解,再立即清洗。为什么压力太大还是太低?也许是管道堵塞了,需要清理清理。另一种可能是由于管道出现了泄漏。检验阻塞或泄漏时,应逐段进行。采用梯度洗脱时,由于多种溶剂混和,组分不断变化,产生了一些特殊问题,必须引起足够的重视。PS:(在液相色谱中对成分复杂的样品,采用梯度洗脱法。在同一分析周期内,不停地改变流动相的浓度比例,称为梯度洗脱。这样,在一个复杂样品中,性质差异较大的组分,就能达到各自合适的容量因子 k的分离效果。
在实际应用中,有几点需要注意:(1)流动相过滤在实际操作中由于不可能做到专瓶,容易造成交叉污染,对于复杂的配比流动相影响较大。因此,使用后一定要用水冲洗。在使用之前不放心的话也可以清洗。(2)流动相过滤经济成本较高。购买一套滤芯要3000多元,而且滤芯是比较容易损坏的设备。过滤器成本高,有的进口一片就要几十元。按照普通液相柱的正常使用寿命计算,过滤片的成本将远远高于色谱柱。而且在使用过滤片时,有些会引起流动相二次污染,原因是滤片不合格。(3)流动相过滤耗时较长。对于溶剂过滤器,有一个预清洗、安装、使用、使用后清洗、烘干的过程,也至少要有一个小时。这一代价也不容忽视。
造成堵塞的原因之二:使用流动相时细菌污染。指出:刚开始流动相无长菌性细菌,在使用中产生细菌污染。在使用多元液相色谱仪时,这主要是一个不健康的使用习惯。举例来说:50%流动的流动相,有两种使用方法。一种方法是在上机之前把水混合在一起,另一种方法是在流路 A放纯,而流路 B放纯水。就单纯的实验效果而言,后一种具有明显的优势:一是简单,无需另一种计算比例混合,二是比例,可以得到保留时间的重复性的实验效果。但它有一个致命的缺点,就是纯水在流动相瓶中存活数天(许多情况下,不仅用纯水作为流动相,而且用缓冲盐溶液,本身就是的肥料,细菌生长得更快),一旦出现细菌柱子,就会迅速分解。这样就要求操作者每次实验都要用新配制的纯水,更要求每次实验后要换水,换成冲洗干净,这点在实际工作中很多人意识不强,但在多次使用中总有一两次会漏掉,但往往这一两次就足以产生致命的影响。由于液相色谱柱的堵塞是不可逆的。
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充填气相色谱柱通常简称填充柱,在实际分析工作中应用十分广泛。根据资料统计,每天的色谱分析工作中80%的工作都是用填充柱进行的。充填柱虽然在分离效率和分析速度上优于毛细管柱,但其制备方法相对简单,定量准确,尤其在一些分析领域(如气体分析、微量水分析)有的用途。就开发而言,虽然毛细管柱有逐渐取代填充柱的趋势(例如,一些日常分析使用 PLOT柱来替代过去常用的气固色谱填充柱),但至少在当段时间内,填充柱仍然是一种非常有用的分析分离方法。
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充填柱主要分为气固色谱柱和气液色谱填充柱。固定相是色谱柱的关键部分。这一节我们先介绍柱管的选择及处理方法,然后分别着重于气固色谱柱和气液色谱柱中固定相的内容。
充填柱管选型及处理
常用不锈钢管、铜管、铝管、铜管、铜管、铜镀镍管、玻璃管和聚四氟乙烯管等[1-5]。以前人们很少使用铜管和铝管,因为催化活性很强,容易变形。一般在2~4毫米的填充柱内径进行分析时,填充柱的内径可以大一些,一般是5~10 mm。可以选择1~5 m的长度。圆柱可以是螺旋状或 U形的形状。采用后一种方法容易得到较高的柱效。若采用螺旋式结构,则应注意柱圈径的大小对柱度有一定的影响[3-6],一般柱圈径应该是柱圈直径的15倍。
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