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圆柱:10-15 m常数下的简单样品的分析25-30 m标准柱长满足大多数应用50 m,60 m,100 m复杂样品分析直径:用0.53 mm大口径代替填充柱,可承受较大体积进样,痕量分析0.32 mm宽,分流/不分流进样,可承受较大体积进样0.25 mm窄径分流进样, GC/M
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圆柱:10-15 m常数下的简单样品的分析25-30 m标准柱长满足大多数应用50 m,60 m,100 m复杂样品分析直径:用0.53 mm大口径代替填充柱,可承受较大体积进样,痕量分析0.32 mm宽,分流/不分流进样,可承受较大体积进样0.25 mm窄径分流进样, GC/MS应用,柱效更高0.18毫米微径分离高柱效快0.10毫米 GC,对仪器分离要求高膜层厚度10 um薄膜,保留和柱容量低适用于高沸物、组分密集样品或热敏化合物0.25~0.50 um标准膜厚。1.0~10.0 um厚膜保持柱能力高适用于低沸点挥发性化合物厚膜有利于掩蔽活,高温下柱损失较大。
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如60℃至240℃/260℃等色谱柱的温度范围分别表示什么?60℃—该温度使用柱效会降低的温度下限,但不会损伤色谱柱240℃—恒温上限,可在该温度下长期使用260℃—程序升温温度上限,不能超过该温度,并且该温度使用时间不得超过10分钟15.了解液相色谱柱的若干参数以及安捷伦色谱柱的分类和适用范围表面积-颗粒表面和内孔表面之和,以m2/gram表示;高表面积对多组份样品分离有很强的保持性,柱容量和分离程度;具有较低表面积的填料往往能迅速达到平衡,对梯度淋洗尤其重要直径-60-10,000个微粒孔或空腔的平均尺寸大孔内的填料颗粒能延长溶质大分子在填料表面停留的时间,达到充分分离,改善峰形;样品 MW≤4000,选择80°°的孔径;碳盖层-对色谱分离的影响,与基体物质相连接的键合相量。高碳率:更高的分辨率,更长的分析时间。
联用的定量经验:1、要用目标离子的碎片定量,特征性强,排除干扰;2、在定量分析方法设置上,尽可能提高扫描速度,提高准确率和重复性(通过 a减少扫描质量数的范围,可增加目标峰的扫描次数,或将一个样品全部分析时间断分为 n个 segments,对目标离子单独设置扫描模式);3、经色谱柱分离后,一定要进行定量分析,避免竞争性离子的存在影响目标离子的离子化效率;如果目标分子没有从竞争分子中完全分离,则使目标分子的离子化效率降低,造成样品分子的定量结果偏低,当然标准浓度样品也应采用同样的方法进行分析。4、如果样品全部是纯品,无需通过色谱柱直接进样分析,包括做标准曲线的样品(尽管不推荐直接进样分析)。5、如果所用的离子源的喷针位置是可移动的,一定要记得在做标准曲线时做其位置,否则其位置移动后在相同条件下进入质谱的离子流量会发生变化,标准曲线就不能使用了!不改变 shealthgas和 auxgas的流速,否则对进入质谱的样品数量都会产生影响,这将影响到质谱的样品数量。
建立的标准曲线一个月后,如要重复使用,就用 QC样品来检验标准曲线!7、对扫描范围、流动相组成、梯度、流速等方面不做任何改动,否则应重做标准曲线。目标峰扫描次数、流动相组成改变了离子化效率,流速改变了色谱峰的保留时间和峰宽。离子阱的优点在于多层-定性层,而四级柱的强项在于量化;对热稳定性差的样品,增加气速,降低毛细管温度,保证定量的重现性,一旦该方法固定后,不要轻易改变。
坡度洗脱的流动相选择不当要注意溶剂的溶解性,不相容性溶剂不能作为梯度洗脱的流动相。部分溶剂混溶于一定比例,超过一定范围后就不能互溶,使用时更要注意。同时,在与缓冲溶液混合时,也会发生与缓冲剂混合,在使用过程中需要特别注意。不计空白梯度洗脱为保证良好的重复性,梯度洗脱的溶剂纯度要求较高。由于弱溶剂中的杂质在色谱柱上被强溶剂洗脱,在分析样品之前,必须对样品进行空白梯度洗脱,识别溶剂杂质峰。分级洗脱溶剂需要完全脱气,以防止在混合过程中产生气泡。没有考虑溶剂混合引起的粘度变化由于混合溶剂的粘度随组分而变化,因此,在梯度洗脱过程中常常会发生压力变化。比如,和水的粘度都比较小,当它们以相似比例混合时,粘度增加很大,这时的柱压比或水为流动相时大一倍。所以在梯度洗脱时要注意防止压力超过输液泵或色谱柱可以承受的大压力。
六通阀的正确使用与维护①样品进样前,要用0.45μ的滤膜过滤,以减少微粒对进样阀的磨损。②旋转阀芯时不要太慢,不要停留在中间位置,否则流动相受阻,使泵内压力急剧上升,甚至超过了泵的大压力;再转到进样位置,过高的压力会使柱头损坏。③为了防止进样阀内的缓冲盐及样品残留,每次分析结束后应冲洗进样阀。一般可采用清水冲洗,或先用溶样溶剂冲洗,再用清水冲洗。
“堵”的原因之三:操作不当。有下列几种常见问题:(1)更换部件时选择了错误的型号,或者管线材料不符合标准,接口不匹配,在拧紧时产生变形,使管路堵塞。(2)样品处理液净化不干净,造成六通阀与柱间的堵塞长期存在。(3)在使用手动六通阀时,有些人可能由于手劲小的原因,转动不到位,造成流道形成死堵,压力迅速上升超过警戒值.自动进样的情况类似,如果六通阀也会形成死堵,造成流道形成死堵,压力迅速上升超过警戒值.自动进样的情况类似,如果六通阀也会形成死堵,导致超压。
原因讲了不少,现在介绍一下查堵的方法。出现“堵”的现象后,要找出原因,主要是什么地方发生了“堵”。要注意的是,在大多数情况下,在整个系统中只有一处堵塞。查堵的方法是从尾部往前逆分段拆开,仔细观察压力值,如果有一个部件(除柱子外)上和下压差大,即基本可以判断出这种配件堵塞。对于柱塞问题,可通过更换相同规格的柱压是否一致来判断。推荐先换柱,看看压力是否仍然很大。接着为柱前管段,向前检查,依次检查。这里再谈一谈“漏洞”。在流动相瓶和废液瓶之间的液相色谱仪流道为全封闭系统,内压非常高,但外部可保证一滴不漏。假如有一个部件出现泄漏,那么问题就在这里。
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