DNA连接酶与DNA聚合酶用途不同
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。如基因工程中,大肠杆1菌连接酶连接黏性末端,T4连接酶既可连接黏性末端,又可连接平末端。
DNA聚合酶在DNA copy中起做用,主要是连接DNA部分片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。
据研究表明RNA聚合酶拥
拓扑异构酶
DNA连接酶与DNA聚合酶用途不同
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。如基因工程中,大肠杆1菌连接酶连接黏性末端,T4连接酶既可连接黏性末端,又可连接平末端。
DNA聚合酶在DNA copy中起做用,主要是连接DNA部分片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。
据研究表明RNA聚合酶拥有现代蛋白质聚合酶的许多特征,它可以进化从而识别出RNA启动子,然后copy RNA。研究意味着,生命进化早期出现的同样的RNA酶也可能表现出如此复杂的生物学特征。
有证据表明,RNA先于DNA和蛋白质出现。例如,人体细胞内制造蛋白质的“机器”核糖体就由RNA制造而成。此外,DNA也由RNA组成。由于RNA是一种万1能工具,可以同时发挥蛋白质和DNA的功能,这表明后来进化出现的DNA和蛋白质是一种“升级”,以增强起初由RNA支持的细胞功能。昂劳实验室发现的聚合酶表明,RNA copy在原始生命体内确实可能存在。
DNA新链的延伸由DNA聚合酶 III所催化。为了copy的不断进行,解旋酶须沿着模板前进, 边移动边解开双链。由于DNA的解链,在DNA双链区势必产生正超螺旋,在环状DNA中更为明显,当达到一定程度后就可能造成copy叉难以再继续前进,但在细胞内DNA的copy不会因出现拓扑学问题而停止,因为拓扑异构酶会解决这一问题。
随着引发体合成RNA引物,DNA聚合酶 III开始不断地将引物延伸,合成DNA。DNA聚合酶 III是一个多亚基复合二聚体,一个单体用于前导链的合成,另一个单体用于滞后链的合成,因此它可以在同一时间分别copyDNA前导链和滞后链。虽然DNA前导链和滞后链copy的方向不同,但如果滞后链模板环绕DNA聚合酶III,并通过DNA聚合酶 III,然后再折向未解链的双链DNA的方向,则滞后链的合成可以和前导链的合成在同一方向进行。

以Riboclone M-MLV CDNA合成技术为例。Riboclone M—MLV cDNA合成系统采用M—MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶,使合成的cDNA更长。该系统的链合成使用M-MLV反转录酶,cDNA第二链合成采用置换合成法,采用RNaseH和DNA聚合酶I进行置换合成,用T4 DNA聚合酶切去单链末端,方法简便易行。

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