新技术提升蛋白质结晶成功率
超构材料21世纪初被提出,截至目前它仍然是非常活跃的前沿领域。其中的微结构,大小尺度与它作用的蛋白质尺寸相当,因此得以对蛋白质的结晶过程施加干预,对蛋白质的聚集态形成起到促进作用,从而降低了两步成核中的步能垒。其次,通过材料本体结构的晶格对聚集态蛋白质分子进行引导排列,促进蛋白质分子的有序排列和晶核形成,从而降低了两步成核中的第二步能垒。
尽管通过实验
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新技术提升蛋白质结晶成功率
超构材料21世纪初被提出,截至目前它仍然是非常活跃的前沿领域。其中的微结构,大小尺度与它作用的蛋白质尺寸相当,因此得以对蛋白质的结晶过程施加干预,对蛋白质的聚集态形成起到促进作用,从而降低了两步成核中的步能垒。其次,通过材料本体结构的晶格对聚集态蛋白质分子进行引导排列,促进蛋白质分子的有序排列和晶核形成,从而降低了两步成核中的第二步能垒。
尽管通过实验和理论证明了超构材料在蛋白质结晶方面的巨大潜力,但要充分发挥其优势则必须兼容当前蛋白质结晶通过的高通量筛选系统。目前国际上普遍采用液体处理机器人来进行高通量结晶筛选,筛选一个结晶条件的蛋白样品消耗体积为纳升级别。因此,如何,稳定地将成核剂添加到高通量系统的同时,又不对结晶系统造成大的影响成为急需解决的问题。
随后通过优化生产和制备工艺,考察了各生产因素对成核剂尺寸和稳定性的影响,确定了适合高通量蛋白质结晶筛选的成核剂混悬剂的制备工艺流程。这是一种含有具有表面超结构的有机无机复合材料,其尺寸分布在几百纳米到几微米之间。该产品的组成为材料颗粒与水溶液的混悬液。在蛋白质结晶筛选实验中,使用该产品有助于提高蛋白质结晶筛选的成功率,包括改善晶体的分辨率和筛选新的结晶条件,使不结晶或难结晶的蛋白质成功结晶,展现了巨大的应用潜力,使用该成核剂已经成功结晶和解析十多个蛋白质晶体结构。
此外,针对能够结晶的蛋白质分子,成核剂混悬液在筛选新的结晶条件,提升结晶的分辨率方面同样有效。目前,院已经与国内超过18个实验室开展了合作,助力我国的生命科学和生物研究。
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蛋白质分子的三维结构是生命科学研究中极为重要的信息,X射线单晶衍射技术是目前获得结构信息的手段,但如何筛选到个蛋白晶体是该技术必需的步,也是制约结构生物学发展的主要瓶颈问题之一.现在一般通过规模筛选的方法从众多的溶液中筛选出可结晶的条件,但是工作量较大,效率也不高.回顾了近年来在提高结晶筛选效率方向取得的成就。
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通过红外光谱,扫描电镜,X射线衍射对产物的晶型,形貌及物相进行了详细表征,初步探讨了文石晶体形成机理及生长机理。本文研究的主要内容及所获得的结论如下:1.常温常压下,以竹蛏韧带纤维状蛋白质为基底,采用气体扩散法可以在较大的条件范围内合成出纯文石晶体:即稀硫酸浓度0.1mol-L-1,NH4HCO3粉末19.0g,CaCl2浓度0.9-9.0mmol·L-1,溶液高度10-30mm,反应温度20-30℃,结晶时间3-12小时。而空白对照(以玻璃盖玻片为基底)制备出的晶体主要为菱形方解石,还有少量文石和球文石。
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