第yi代腺病毒载体:一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体称为第yi代腺病毒载体,此类型载体在未经过纯化时可引发机体产生较强的炎1症反应和免1疫反应,纯化后可以安全使用,体内表达周期可达4周。
第二代腺病毒载体:E2A或E4基因缺失的腺病毒载体被称为第二代腺病毒载体,产生的免1疫反应较弱其载体容量和安全性方面有所改进,但病毒包装难度和出毒和病毒滴度下降厉害,应用相当局限
逆转录病毒包装
第yi代腺病毒载体:一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体称为第yi代腺病毒载体,此类型载体在未经过纯化时可引发机体产生较强的炎1症反应和免1疫反应,纯化后可以安全使用,体内表达周期可达4周。
第二代腺病毒载体:E2A或E4基因缺失的腺病毒载体被称为第二代腺病毒载体,产生的免1疫反应较弱其载体容量和安全性方面有所改进,但病毒包装难度和出毒和病毒滴度下降厉害,应用相当局限。
第三代腺病毒载体:第三代载体缺失了全部的(无病毒载体,gutless vector)或大部分腺病毒基因(微型腺病毒载体,mini Ad),仅可保留ITR和包装信号序列。第三代腺病毒载体zui大可插入35kb的基因,病毒蛋白表达引起的细胞免1疫反应进一步减少,载体中引入核基质附着区基因可使得外源基因保持长期表达,并增加了载体的稳定性。这一载体系统需要一个腺病毒突变体作为辅助病毒。
腺病毒是如何构成的
病毒滴度滴定(组织培养半数感1染量TCID 50):将分装好的病毒液接种一长满单层Hep-2细胞的96孔板,第yi列每孔加25μl病毒液,作1/lO 稀释,此后依次作倍比稀释,每稀释度接种8孔,zui后一列做阴性对照.对照孔和感1染病毒孔均加入100μl维持液,置37℃ 、5%CO2 培养箱中培养。每天观察并记录出现CPE的孔数及具体时间,待细胞病变不再发展后,观察记录结果,用Reed-Muench法计算病毒滴度TCID 50。
PCR核酸检测实验室布局建设
核酸检测前的生物安全防护(工作人员个人三级防护的穿戴)
1、穿戴流程:在基因扩增实验室的清洁区(更衣区)或者普通实验室的洁净区,工作人员按顺序依次穿戴好一次性帽子、医1用N95口罩、一次性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防护目镜和双层乳胶手套,进入样本处理工作区域或实验室。
2、要点提示:
2.1、具备标准基因扩增布局条件的实验室,应在清洁更衣区做好个人三级防护,条件有限的实验室亦可选择在一洁净的实验室中按流程穿戴好个人三级防护。
2.2、需佩戴医1用N95口罩,若无医1用N95口罩,可以考虑用普通N95/KN95口罩外加一次性外1科口罩的组合方式,但不要佩戴有呼吸阀的N95口罩。
2.3、佩戴N95口罩时需检查密闭性,通过双手按压、深呼吸、左右转头等动作严格检查口罩是否佩戴正确。
2.4、一次性防护服已具备新型冠状病毒核酸检测的防护需求,有条件时可以考虑加穿一次性反穿隔离衣,穿衣时需由他人协助。
2.5、穿戴整齐的工作人员,应按要求尽快进入样本处理的实验区域开展工作,严禁穿戴三级防护后再进入普通实验区域或办公区域。
启动子:RNA聚合酶特异性识别结合和启动转录的DNA序列。有方向性,位于转录起始位点上游。上游启动子元件:TATA盒上游的一些特定DNA序列,反式作用因子可与这些元件结合,调控基因的转录效率。反应元件:与被的信息分子受体结合,并能调控基因表达的特异DNA序列。增强子:与反式作用因子结合,增强转录活性,在基因任意位置都有效,无方向性。沉默子:基因表达负调控元件,与反式作用因子结合,抑制转录活性。Poly(A)加尾信号:结构基因末端保守的AAUAAA顺序及下游GT或T富含区,被多聚腺苷酸化特异因子识别,在mRNA 3′端加约200个A。(2)反式作用因子:能识别和结合特定的顺式作用元件,并影响基因转录的一类蛋白质或RNA。
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