基因符号:RAB11
说明:抗活性Rab11小鼠单克l隆抗l体
背景:Rab系列的小GTP酶是控制膜运输的机械的关键要素。 Rab11已显示可控制通过回收内体的运输。
免l疫原:活性Rab11的重组全长蛋白
应用范围:IP,IHC
推荐的稀释液:IP:1μg,用于12 mg总细胞蛋白
IHC:1:50100稀释
重组人Rab3 蛋白
基因符号:RAB11
说明:抗活性Rab11小鼠单克l隆抗l体
背景:Rab系列的小GTP酶是控制膜运输的机械的关键要素。 Rab11已显示可控制通过回收内体的运输。
免l疫原:活性Rab11的重组全长蛋白
应用范围:IP,IHC
推荐的稀释液:IP:1μg,用于12 mg总细胞蛋白
IHC:1:50100稀释
浓度:1 mg / ml
格式:液体
同种型:IgG2b
纯度:从腹l水中纯化
存储缓冲区:
防腐剂:否
成分:PBS(不含Mg2 +和Ca2 +),pH 7.4、150 mM NaCl,50%甘油
种属反应性:抗活性Rab11抗l体识别来自脊椎动物的活性Rab11。
储存条件:储存于-20°C。 避免冻结/解冻周期
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等。
悬浮细胞
1.培养细胞并根据需要用活化剂或抑制l剂刺激。
2.进行细胞计数,然后通过离心沉淀细胞。
3.吸出培养基,并用冰冷的PBS洗涤两次。
4.完全除去PBS洗涤液,然后向细胞沉淀中加入冰冷的1X分析/裂解缓冲液
(每1 x 107池0.5 – 1 mL)。
5.通过重复移液裂解细胞。
6.将裂解物转移至适当大小的试管中,并置于冰上。
7.如果发生核裂解,则细胞裂解液可能变得非常粘稠,难以移液。如果这
发生时,裂解液可通过27号注射l器针头3-4次以剪切
基因组DNA。
8.通过离心10分钟(在4°C下为12,000 x g)清除裂解物。
9.收集上清液并将样品保存在冰上以备立即使用,或速冻并保存在-
70°C以备将来使用。
阳性和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量
注意:体内刺激细胞会激l活大约10%的可用Rab35,而
体外GTPγS蛋白负载将激l活近90%的Rab35。
1.将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中(或使用1 μg纯化的Rab35蛋白)。
2.向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA(至20 mM终浓度)。
3.将5 μl 100 XGTPγS(至100 μM,终浓度)加到一个试管中(阳性对照)。
4.在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP(至1 mM,终浓度)(阴性对照)。
5.在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。
6.通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2(至60 mM
)。
目前还没有直接测定Arl1-gtpase活性的方法。
NewEast Biosciences Arl1激l活检测试剂盒是基于特定构型的单克l隆抗l体特异性识别Arl1 GTP,但不识别Arl1 GDP的抗l体。鉴于克l隆抗l体对其抗原,活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠,重现性一致。
这些抗Arl1-GTP单克l隆抗l体也可用于监测细胞中Arl1的激l活免l疫组织化学检测。NewEast Biosciences Arl1激l活分析试剂盒提供了一种简单、的方法来监测激l活Arl1。每个试剂盒提供足够的量来进行20次分析。
Gα13活化试验。MEF细胞分别用LPA(第2道)或不加LPA(1道)处理。细胞裂解物
用抗活性Gα13单克l隆抗l体(Cat)孵育。#26902)(顶面板)。这个用抗Gα13兔多克l隆抗l体(Cat)免l疫印迹法检测沉淀活性Gα13#21005年)。底部的面板显示了用抗