磁性细胞标记方式
应用MACS技术进行磁性细胞分选重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记，并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。
1、直接磁性细胞标记(Direct magnetic cell labeling)
(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是、zui特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大
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磁性细胞标记方式
应用MACS技术进行磁性细胞分选重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记，并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。
1、直接磁性细胞标记(Direct magnetic cell labeling)
(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是、zui特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。
2、间接磁性细胞标记(Indirect magnetic cell labeling )
(磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞)间接磁性细胞标记需要联合使用单ke隆或者多ke隆抗ti和MACS间标微珠。未结合抗ti、生物素化抗ti或者荧光素标记抗ti均可作为一抗标记细胞,再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗,均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用:当没有直标磁珠时;需要用几种抗ti的混合物同时分选或去除多种类型的细胞;间接标记有放大作用,因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用;使用自备或者配体的磁珠分选中。( -般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。透射电镜自噬小体检测胰酶消化，收集作用后的细胞，离心，先将细胞块固定在2。)
关于细胞培养的常见问题:
Q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理？
A: 贴壁细胞在移除原培养液后，用 PBS 冲洗 2-3 遍；悬浮细胞离心移除原培养液后，加入 PBS 重悬，离心移除 PBS; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍，用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。
Q：细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗？
A：长期保存的细胞应当放在液氮（-196℃）中保存，短时间（一般 1 周-2 周）可以存放在 -80℃。
Q：培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？
A：都可以。只是在使用密封盖培养瓶时，瓶盖旋至约 2/3，不要完全拧紧，预留约 1/3 以便细胞可以透气；有些的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。
Q:何谓 FBS,FCS,CS,HS
A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之间没有区别，都是指胎牛；FCS 不是正规命名，尽量不使用。Calf Serum（CS）则是指小牛。Horse Serum(HS)则是指马。
2、脂质体转染法操作步骤如下 [方法二]：
(1) 以 5×105 细胞/孔接种 6 孔板 (或 35 mm 培养皿) 培养 24 小时，使其达到 50～60% 板底面积。
(2) 在试管中配制 DNA/脂质体复合物方法如下：
①在 1 mL 无 DMEM 中稀释 PSV2-neo 质粒 DNA 或供体 DNA。
②旋转 1 秒钟，再加入脂质体悬液，旋转。
③室温下放置 5～10 分钟，使 DNA 结合在脂质体上。
(3) 弃去细胞中的旧液，用 1 mL 无 DMEM 洗细胞一次后弃去，向每孔中直接加入 1 mL DNA/脂质体复合物，37℃ 培养 3～5 小时。
(4) 再于每孔中加入 20%FCS 的 DMEM，继续培养 14～24 小时，
(5) 吸出 DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜 10%FCS 的 DMEM，2 mL/孔，再培养 24～48 小时。
(6) 用细胞刮或消化法收集细胞，以备分析鉴定。
3、稳定的脂质体转染方法如下：
(1) 接种细胞同前，细胞长至 50% 板底面积可用于转染。
(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前 (2)、(3) 步骤。
(3) 在每孔中加入 1 mL、20%FCS 的 DMEM，37℃ 培养 48 小时。
(4) 吸出 DMEM，用 G418 选择培养液稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染，方法参照细胞筛选法进行。
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