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被测样品颗粒颗粒在液相系统中的第二个来源是试样。有些实验室把样品放入自动采样盘(或人工进样)之前,首先要经过一个0.45μ m针筒式过滤器过滤。这种方法可以有效地去除样品中的微粒。但这一过程要注意一点:你用了针筒过滤器,不可能获得经过过滤器测试的样品,总会有或多或少的损失。损失源于以下几个方面:过滤器过滤膜的吸附、过滤器滤出微粒的吸附、针筒滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等。
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如有丢失,过滤后的液体中被测物的含量或浓度是否与原始样液的含量或浓度相同?这通常需要通过实验加以证实。确定此步骤会增加工作量和成本。过滤是一种消耗,每台过滤器的价格从几元到十几元。但是在分析食品中的残留物时,由于底物大多比较复杂,因此过滤这一步就成为的步骤。实践分析工作中,一般检测每组样品都要配外标、加回收或质控样品,所以只要检测得到的信噪比达到检出限要求,就可以认为这一步可以作为系统误差而忽略。
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探测器如为正常使用,检测器应根据其性质、按说明书规定进行清洗。比如, UV/VIS检测器或 FL检测器,当冲洗柱和系统时,检测器循环池中的污染物也被一起清洗。但蒸发光检测器或质谱仪需要根据说明书定期清洗。使用中会产生难以挥发的污染物沉积,如离子源的喷针、毛细管、锥孔、预四极等元件,因此需要定期清洗。并且联接具有这些探测器的系统冲洗时,好与这些探测器断开,以减少对探测器的污染。
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概述总而言之,如果实验室日常使用的液相色谱仪能够认真做好这三件事——除气、过滤、冲洗,您的仪器就能得到很好的预防性维护,使用起来也会觉得顺手。诚然,在实际操作中遇到的问题并不那么简单,但是这三个好习惯是正确操作、使用 HPLC系统的基础。
LC对大多数人来说都是很好上手的仪器,但就算是使用了几年、有经验的分析员也会习惯于一些错误的操作(师傅教错了吗?),常常造成某些仪器故障。便利、的分析过程固然重要,但为了多做样品而忽略了一些必要的步骤,常常会得不偿失,哪些操作不能做?哪一种是不可偷的?这些小故障的机率并没有教过呢?在液体相中的四个关键因素是什么呢?
从针筒中排出空气:用微型抽取液体样品,只需反复将液体抽入针筒然后迅速将其放回样品瓶,即可排除空气。也有一个比较好的方法,即更换3~5次,试样数量为预定注射量的2倍左右,每次取样后,垂直地拿起,针尖朝上,留在内的空气应跑到针管顶部,推进塞子,空气就会被完全排掉。确保进样量的准确性:用置换取约2倍计划进样量的样品,垂直拿起,针尖朝上,让针穿过一层纱布,这样纱布就能吸收从针尖流出的液体。推动塞,直至读取所需的数值。把针尖用纱布擦干。此时的液量已测得,需再将若空气注入。如不小心推下柱塞,空气保护了液体使其不被排放。
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进样法:手拿。使用一只手(通常是左手)扶针插入垫片,并在注射大量样品(即气体样本)或柱前压力极高的情况下,防止气相色谱仪注样器产生的压力使活塞弹出(用右手的拇指按压活塞顶部)。允许针尖穿过垫片,尽可能深地进入进样口,按压活塞保持1秒钟,然后尽可能快而稳地将针尖拔出(在拔出时继续压住活塞)。进样时间:进样时间对柱效有很大的影响。当进样时间太长时,遇使色谱区增大而降低柱效率。所以,对冲洗法色谱来说,进样时间越短越好,通常要小于1秒。汽化室内温度选择气体室温与样品的化学和热稳定性、沸程范围、进样口类型等有关。适宜的气化室温度,即能使试样瞬间充分气化,而不会造成试样分解。超温时,气化速率较慢,使峰形不规则,出现平头峰或伸舌峰;过高则导致出峰数目的变化,产生前延峰,甚至样品分解。通过多次进样,发现气化室温较柱温高50-100℃,比柱温高50-100℃,比高沸点高50-70℃,对样品组分的选择更为合适。太高太低的温度都会影响柱效。
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