低温生物菌种——菌种分离方法
寄主分离法即从生长有某种真菌的寄主体上（如茯苓、木耳木段）取下木片，进行分离的方法。如木耳制种时，可选朵大、出耳多、质厚的耳棒（即长有木耳的木段）。采集后，削去耳根下的树皮，将其横断面锯成1 厘米厚的木片，在无菌条件下，切去无耳菌丝部分，留下有耳菌丝部分，浸入水中1 分钟，取出再用无菌水冲去木片上的液体。然后，用解剖刀将木片切成0 . 5 厘
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低温生物菌种——菌种分离方法
寄主分离法即从生长有某种真菌的寄主体上（如茯苓、木耳木段）取下木片，进行分离的方法。如木耳制种时，可选朵大、出耳多、质厚的耳棒（即长有木耳的木段）。采集后，削去耳根下的树皮，将其横断面锯成1 厘米厚的木片，在无菌条件下，切去无耳菌丝部分，留下有耳菌丝部分，浸入水中1 分钟，取出再用无菌水冲去木片上的液体。然后，用解剖刀将木片切成0 . 5 厘米的小块，放入斜面培养基内，置24 ～26 ℃下培养，及时淘汰杂菌，选取纯菌丝进行移植培养，即得菌种。
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实验室的传代保藏过程
1. 按说明书要求复溶菌粉，转种于适当的增菌培养基内（G1），复壮后转接至平板上，并于适当温度下培养适当时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代（G2）。
2. 鉴定完成后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌落转接斜面作为工作用。此时，保藏为第2代，但工作用则为第三代。
3. 将第2代管冷冻保存，将工作用于适当温度下培养适当时间后可用于试验。
4. 取一支冷冻保存的G2代转种于平板和斜面培养基上，平板上的制成冷冻保藏管第三代（G3），斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用（W3）。
5. 将第三代（G3）冷冻或低温保存，将生长、转种后的G2经灭菌处理后丢弃。
6. 当工作用代数小于5时，可直接用上一代工作用转接下一代工作用，如W3可直接转接为W4。
7. 按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序、保藏和使用。
以上方法中，被分为两类。传代用和工作用，传代用用于甘油冷冻管法保藏，工作用用斜面低温保藏法保藏。
实验证明，甘油冷冻管的有效期至少为2年，但其主要适用于细菌（需氧）、酵母菌的传代、保藏、真菌和芽孢类细菌则需应用其它方法。
低温生物处理的优势
我国北方污水处理一直受到低温影响，尤其氨氮处理效果差、出水难以达标等问题的困扰。目前污水厂一般采用增加污泥浓度、水力停留时间、池体保温加盖等措施以提高处理效果，但投资和运行费用增加的问题也随之而来。温度降低所导致的生物处理效果下降，归根结底是由于当水温15℃时，处生化系统中存在的低温微生物的数量和活性不能达到常温下中温菌的水平，污水中的有机污染物质不能被迅速降解所导致的。因此，采用投加耐低温生物菌剂的方式对东北地区污水处理厂生化处理系统的耐低温改良，对低温启动和污水处理厂污水稳定达标排放意义重大。
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