亲和柱原理介绍
亲和层析(IAC)可称为色谱技术,是一种利用抗原特异性可逆结合特性的SPE技术,根据抗原的高选择性,从复杂的待测样品中提取目标化合物。主要原理是将抗、惰性微珠共价结合,然后装入小柱,将被测溶液流过亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,然后用洗脱缓冲液洗脱抗原(被测物),从而得到纯化的抗原(被测物),收集的抗原样品液可直接用于 HPLC 分析或处理后用荧光光度计
维生素B12亲和柱价格
亲和柱原理介绍
亲和层析(IAC)可称为色谱技术,是一种利用抗原特异性可逆结合特性的SPE技术,根据抗原的高选择性,从复杂的待测样品中提取目标化合物。主要原理是将抗、惰性微珠共价结合,然后装入小柱,将被测溶液流过亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,然后用洗脱缓冲液洗脱抗原(被测物),从而得到纯化的抗原(被测物),收集的抗原样品液可直接用于 HPLC 分析或处理后用荧光光度计检测。
亲和柱的适用范围
亲和柱,适用于基质复杂、要求低的样品中真菌检测的净化。亲和柱中含有抗体,能够结合萃取液中目标真菌。在净化过程中干扰物质从柱上淋洗下来,而目标真菌能够固定在柱上,之后通过适当溶剂将目标真菌从亲和柱上洗脱下来,实现了与杂质的分离。
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亲和柱净化步骤
注意:整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!
----3mL柱管取出上方堵头,减去上堵头螺纹下突出部分,插回柱子上,另一端与20mL针筒固定后使用;将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断,然后再插回柱子上(柱管内偶见有小气泡属正常现象,不影响亲和柱的使用);
----准确移取上述混匀滤液,注入针筒中,调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过亲和柱;
----用20mL 水冲洗柱子(对于饲料及玉米加工副产品等颜色较深的样液,先用10mL 0.1%吐温20-PBS清洗,再用10 mL 10%水冲洗柱子,之后用10mL水冲洗柱子。),流速1秒/滴,弃去流出液,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体;
----准确加入1.5mL(色谱级)洗脱,流速自然重力,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液,进行相关测定。
亲和柱适用注意事项
(1) 呕吐毒素对人体有害,应戴手套操作。凡接触到标样的玻璃器皿都要用5%次酸钠浸泡过夜。
(2) 不要使用过有效期的亲和柱。
(3) 亲和柱应在2~8℃保存。不要冷冻。
(4) 使用前,亲和柱需至少提前半小时回温至室温(25℃左右)。
(5) HPLC液相测定值、试剂盒计算值接近zui高检出值时,样本的实际含量可能大于柱容量而造成流穿,建议减少上样体积重新过柱。
(6) 称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整,建议不少于10g样。
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