信使RNA(mRNA)早先发现于1960年,在蛋白质合成过程中负责传递遗传信息、直接指导蛋白质合成,具有以下特点。
1.含量低,占细胞总RNA的1%~5%。
2.种类多,可达105种。不同基因表达不同的mRNA。
3.寿命短,不同mRNA指导合成不同的蛋白质,完成使命后即被降解。细菌mRNA的平均半衰期约为1.5分钟。脊椎动物mRNA的半衰期差异极大,
核酸纯化
信使RNA(mRNA)早先发现于1960年,在蛋白质合成过程中负责传递遗传信息、直接指导蛋白质合成,具有以下特点。
1.含量低,占细胞总RNA的1%~5%。
2.种类多,可达105种。不同基因表达不同的mRNA。
3.寿命短,不同mRNA指导合成不同的蛋白质,完成使命后即被降解。细菌mRNA的平均半衰期约为1.5分钟。脊椎动物mRNA的半衰期差异极大,平均约为3小时。
4.长度差异大哺乳动物mRNA长度为5×102~1×105nt原核生物与真核生物的mRNA虽然在结构上有差异,但功能一样,都是指导蛋白质合成的模板。
棉花等酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法:
1 取2g新鲜幼嫩的叶片放入研钵中,加入液氮后、充分研磨,待成极细的粉末状时迅速转入到50ml离心管中。
2 在50ml离心管中加入10ml冰预冷的提取缓冲液,在涡悬振荡器上充分混匀。
3 于4℃,2700×g离心20分钟,倒去上清液。
4 在沉淀中加入5ml裂解缓冲液,在涡旋振荡器上充分混匀
。
5 于65℃水浴锅中温育30min。
6 加入5ml氯1仿/异戊1醇(24/1),并上下翻转以充分混合。
7 于4℃,2700×g离心5分钟。
8 转移上层水相至一新的50ml离心管中。
9 重复步骤7-9一次。
10 加入2/3体积的冰预冷的异丙1醇,并上下翻转以充分混合,至-20℃2h。
11 于4℃,1200×g离心10min。
12 在一新管中加入20ml含80%乙醇15mmol/LNaAc溶液,用玻棒将DNA转入该管(如不能直接用玻棒缠出,可离心后倒出上清,再在其中加入20ml含80%乙醇15mmol/LNaAc溶液),放置20min后稍许离心,移走上清并吸出残存乙醇,室温干燥。
13 加入1 0mlTE(10mmol/LTris-HClPH=8 0,1mmol/LEDTA)并加入终浓度为20(g/L的RNaseA,过夜。
14 风干,用50μlTE缓冲液溶解,存于-20℃备用。
在整个核酸检测的过程中,zui大的挑战是什么?
不是实验室的负压状态,也不是全副武1装的超负荷工作,访问中工作人员不约而同地提到了一个词:准确。新型冠状病毒检测受到患者病程发展以及样本采集等诸多因素的影响,每一个样本都是一道待解的难题,需要排除各种干扰,才能找到准确结果。为了确保检测结果的准确性,只要检测结果存疑,就必须再次复核,还可能要重新检测。
医学实验室主要检测的是血液样本。医学实验室收到口岸送样后,登记、编号、录入信息,血常规检测为自动化操作,每个样本检测时间为1分钟,可实时获得口岸现场被采样入境人员的白细胞和淋巴细胞计数,作为新冠肺1炎的临床表现判断依据之一。卫生检疫综合实验室和医学实验室多种检测方法同时检测,综合判断,确保结果准确性。
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