等温核酸试剂盒
RPA不受场地的限制,不需要昂贵仪器,对温度要求低,恒温扩增,时间短,可以在资源匮乏地区实现检测的目的,目前已广泛用于食品安全及动物疫病检测,但国内就PRA技术在禽病病原检测中的研究并不多。未来RPA技术可能在以下方面进一步突破:①研发专门引物设计软件,降低引物设计难度。②反应温度范围拓宽,不局限于某一温度,可在某温度范围内完成扩增反应。③实现多重检测
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等温核酸试剂盒
RPA不受场地的限制,不需要昂贵仪器,对温度要求低,恒温扩增,时间短,可以在资源匮乏地区实现检测的目的,目前已广泛用于食品安全及动物疫病检测,但国内就PRA技术在禽病病原检测中的研究并不多。未来RPA技术可能在以下方面进一步突破:①研发专门引物设计软件,降低引物设计难度。②反应温度范围拓宽,不局限于某一温度,可在某温度范围内完成扩增反应。③实现多重检测,结果判定更简便直观。④可扩增长片段核酸。⑤研发出低廉的酶制剂,降低成本。相信随着技术不断进步,势会引起一场核酸检测的革命,取代PCR技术在分子检测中的霸主地位,在禽病病原的现场检测中发挥更大的作用。
试剂盒
自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR,这一技术在不断蜕
变却从未淡出我们的视野。近年来,等温扩增技术的兴起无疑是对PCR的巨大挑战。
等温扩增技术的基因诊断方法,涉及生物检测技术领域,具体是用体外生物检测试剂检测病原微
生物的一种技术。
包括如下步骤:一、对被检样品进行预处理;二、包括目标靶基因数据库的建立;生物信息学的分析比较;
基因组多态性的分型处理和简并碱基的运用,获得各种靶基因的特异性引物两对,分别与靶基因中的六个
独立区域序列特异性匹配;三、进行等温扩增反应;四、分析判断结果。该方法的优点:不需特殊试剂与
设备;高特异性;.灵敏度高;鉴定简便;用途广: 可用于食品、药品、化妆品等领域的质量控制和环境、
水质等监测;用于医学临床诊断,用于代谢性疾病和遗传疾病的基因诊断。
核酸试剂盒
RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,反应温度在37°C左右。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp Basic)含有DNA扩增所需的所有试剂,我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测,产物纯化后可用于下游研究。
在这个基础体系中添入不同的酶和探针,就可以实现多样化的RPA应用。举例来说,TwistAmp exo结合了exo探针技术和核酸外切酶III,能实现数据的实时读取,就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少,适合获得强荧光信号进行动力学分析,不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来,可以一步实现RNA模板的实时扩增。
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