农杆1菌转化法在植物遗传转化中的应用：过去认为受农bacillus宿主范围限制，农bacillus介导的遗传转化只限于双子叶植物。1987年Grimsly首先将玉米条斑病毒的cDNA克1隆至质粒上，用农bacillus侵染的方法将玉米条斑病毒的cDNA导入玉米，使植株表现了系统感1染症状。这个报道有力地证明了农bacillus能够侵染玉米这种单子叶植物。随着载体系统和转
逆转录病毒包装
农杆1菌转化法在植物遗传转化中的应用：过去认为受农
bacillus
宿主范围限制，农bacillus介导的遗传转化只限于双子叶植物。1987年Grimsly首先将玉米条斑病毒的cDNA克1隆至质粒上，用农bacillus侵染的方法将玉米条斑病毒的cDNA导入玉米，使植株表现了系统感1染症状。这个报道有力地证明了农bacillus能够侵染玉米这种单子叶植物。随着载体系统和转化方法的改进，农bacillus介导的遗传转化不再局限于双子叶植物，在一些单子叶植物如水稻、玉米和小麦等重要的农作物上也相继获得成功。
进入20世纪90年代后，农杆1菌转化法在水稻、玉米等重要的农作物上取得突破性进展。首先是1991年Gould和Shen等利用农bacillus转化玉米茎尖分生组织获得转0基因植株。1998年Lupotto也实现了农bacillus转化玉米的成功，Southern杂交结果显示外源基因能够稳定遗传到下一代。
腺病毒载体应用优势
腺病毒载体转0基因效率较高，体外实验通常接近的转导效率；可转导不同类型的人组织细胞，不受靶1细胞是否为分裂细胞所限；容易制得高滴度病毒载体，在细胞培养物中重组病毒滴度可达（10E+11）/ml；进入细胞内并不整合到宿主细胞基因组，仅瞬间表达，安全性高。因而，腺病毒载体在基因治1疗临床试验方面有了越来越多的应用，成为继逆转录病毒载体之后广泛应用且非常具前景的病毒载体。
腺病毒的基因组
腺病毒的基因组以线性的双链DNA形式存在，由蛋白VII和一种称为mu的小蛋白紧密地环绕在其周围，起到类组蛋白样的作用。另一种蛋白V将这种DNA-蛋白复合物连接起来，并通过蛋白VI与病毒衣壳连接在一起。在两条链的5′端各以共价键结合着一个被称为DNA末端蛋白（pTP）复合物（DNA-TPC）的特化的结构，与腺病毒copy密切相关。腺病毒基因组的两端各有一段100bp的反向末端重复序列（ITR），是copy的起始位点。在左端ITR的3′侧有一段长约300bp的包装信号（ψ）介导腺病毒基因组包装入病毒衣壳。对腺病毒而言，只有包括两端的ITR和包装信号（ψ）的约0.5kb的序列是顺式作用元件，也就是说必须由腺病毒载体自身携带，而其他的30余种蛋白都可以通过辅助病毒（或细胞）反式补足。
腺病毒分离与鉴定
1．分离培养 标本应尽早从感1染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物，粪便和尿液等，加抗1生素处理过夜，离心取上清接种敏感细胞（293、Hep-2或HeLa细胞等），37℃孵育后可观察到典型CPE，即细胞变圆、团聚、有拉丝现象，较突出的表现是许多病变细胞聚在一起呈葡萄串状。
2．病毒鉴定 用荧光标记的抗六邻体抗1体与分离培养细胞作用来鉴定腺病毒，也可用血凝抑制（hemoagglutination inhibition，HI）试验或中和试验（neutralization test）检测属和组特异性抗原并鉴定病毒的血1清型。腺病毒可用Shell vial技术进行鉴定。病毒标本经抗1生素和离心处理，取上清接种于有细胞的Shell vial培养瓶，孵育1～2天，用特异性六邻体单克1隆抗1体对其抗原表位进行检测。也可用病1人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。用DNA杂交或内切酶酶切等鉴定分离培养的病毒DNA；PCR可用于腺病毒感1染的诊断，引物设计主要根据腺病毒六邻体、VAI和VAII编码区序列，能检测所有血1清型，而且其敏感性很高，能检测某些patient潜在的腺病毒。用腺病毒41型BgIII-D片段作探针诊断腺病毒腹泻，其检出率可达80%。
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