1.抗活性的Arl1，小鼠单克l隆抗l体（货号26924）：一小瓶–溶于pH 7.4的PBS中的22 μL（1mg / ml），含有50％甘油和0.05％叠氮l化钠。该抗l体特异性识别所有脊椎动物的Arl1-GTP。
2.蛋白A / G琼脂糖（目录号30301）：一小瓶– 400 μL 50％浆液。
3. 5X测定
Rac1 kit
1.抗活性的Arl1，小鼠单克l隆抗l体（货号26924）：一小瓶–溶于pH 7.4的PBS中的22 μL（1mg / ml），含有50％甘油和0.05％叠氮l化钠。
该抗l体特异性识别所有脊椎动物的Arl1-GTP。
2.蛋白A / G琼脂糖（目录号30301）：一小瓶– 400 μL 50％浆液。
3. 5X测定/裂解缓冲液（目录号30302）：一瓶– 30 mL的250 mM Tris-HCl，pH 8，750mM NaCl，50 mM MgCl2，5 mM EDTA，5％Triton X-100。
4.抗Arl1，小鼠单克l隆抗l体（目录号26056）：一小瓶– 100 μL（1 mg / ml）
pH 7.4的PBS中含有50％的甘油。
5. 100 XGTPγS（货号30303）：1瓶– 100 μl，10 mM，使用5 μLGTPγS
GTP标记的0.5 mL细胞裂解物。
6. 100 X GDP（产品目录号30304）：一个样品瓶– 100 μl，100 mM，使用5 μL GDP
GDP标记的0.5 mL细胞裂解物。
1.刺激的和非刺激的细胞裂解液
2.蛋白酶抑制l剂
3. 4°C管摇杆或摇床
4. 0.5 M EDTA，pH8.0
5. 1 M氯化镁
6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液
7.电泳和免l疫印迹系统
8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，pH 7.4，0.15 M NaCl，0.05％Tween-20）
9.免l疫印迹封闭缓冲液（TBST包含5％脱脂奶粉或3％BSA）
10. PVDF或硝l酸纤维素膜
11.二抗
12. ECL检测试剂
1X测定/裂解缓冲液：短暂混合5X储备液，并在去离子水中稀释至1X。 在使用前，添加蛋白酶抑制l剂，例如1 mM PMSF，10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。
储存条件
试剂盒的成分在试剂盒的有效期限内必须存放于4°C条件下保存。
试剂（试剂盒内不提供，由实验者自行配置）
1. 刺激和未刺激的细胞裂解物；
2. 蛋白酶抑制l剂；
3. 4 °C 摇杆或者摇床；
4. 0.5 M EDTA (pH 8.0)；
5. 1 M MgCl2；
6. 2X reducing SDS-PAGE sample buffer；
7. 电泳和免l疫印迹相关试剂；
8. 免l疫印迹缓冲液TBST (10 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 M NaCl, 0.05%
Tween-20)；
9. 免l疫印迹封闭缓冲液 (TBST containing 5% 脱脂奶粉 or 3% BSA)；
10. PVDF或硝l酸纤维素膜；
11. 二抗；
12. ECL 检测试剂；
电泳和转移
1向聚丙l烯酰胺凝胶（17%）中加入15μL/孔的下拉上清液。而且
建议包括预染色MW标准（作为成功转入的指标步骤3）。
2按照制造商的说明进行SDS-PAGE。
3按照制造商的说明，将凝胶蛋白转移到PVDF或硝化纤维膜上
说明。
免l疫印迹检测（所有步骤均在室温下搅拌）
1在电印迹步骤之后，将PVDF膜浸入甲l醇中15次
然后在室温下干燥5分钟。
如果使用硝基纤维素，则应跳过此步骤。
2室温下用5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白在TBST中封闭1小时
不断地搅动。
用抗Arl1单克l隆抗l体孵育，新鲜稀释1:50~1000
（取决于样品中Arl1蛋白质的含量）5%脱脂奶粉或3%
BSA/TBST，室温下持续搅拌1-2小时或4o
过夜。
3用TBST清洗吸水膜三次，每次5分钟。
4用二级抗l体（例如山羊抗鼠IgG，HRP结合物）培养膜，
在室温下，在5%脱脂奶粉或3%BSA/TBST中新鲜稀释1:1000，1小时
5用TBST清洗吸水膜三次，每次5分钟。
6使用您选择的检测方法，如ECL。
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武汉纽斯特生物技术有限公司
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