原位杂交试验
收集斑马鱼的胚胎，在Holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小时后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗，然后换成甲9醇，在-20C 保存，待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧6水处理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养，可阻断色素的形成)
原位杂交技术基本原理
原位杂交技术的基本
染色体原位杂交
原位杂交试验
收集斑马鱼的胚胎，在Holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小时后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗，然后换成甲9醇，在-20C 保存，待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧6水处理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养，可阻断色素的形成)
原位杂交技术基本原理
原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。
为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物。
杂交技术zui重要的因素之一是选择zui适的杂交反应温度。若反应温度Tm 10～15℃，碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链，错配对减少。若反应温度再低（Tm-30℃），虽然互补链之间也可形成稳定的双链，但互补碱基配对减少，错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或更低些的DNA，调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍，因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验，即zui适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。
zui适复性温度（Optimunm renaturation temperature, TOR）：Tor =Tm –25℃
苛刻复性温度：Ts = Tm – (10或15℃)
非苛刻复性温度：Tns =Tm – (30或35℃)
在选择探针类型的同时，还需要选择标记方法。探针的标记方法很多，选择什么标记方法主要视个人的习惯和可利用条件而定。但在选择标记方法时，还应考虑实验的要求，如灵敏度和显示方法等。一般认为放0射性探针比非放0射性探针的灵敏度高。放0射性探针的实际灵敏度不依赖于所采用的标记方法，如随机引物延伸法往往得到比缺口平移法更高的比活性 。在检测单拷贝基因序列时，应选用标记效0率0高、显示灵敏的探针标记方法。在对灵敏要求不高时，可采用保存时间长的生物素探针技术和比较稳定的碱性磷酸酶显示系统。
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