蛋白质含量测定操作方法
1.标准曲线的测定:取12支试管分两组,分别加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升的标准蛋白质溶液,用水补足到1毫升,然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后,在室温(20~25℃)下放置30分钟,于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的首支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值,以蛋白质的含量为横座标,光吸收值为纵座标绘制标准曲
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蛋白质含量测定操作方法
1.标准曲线的测定:取12支试管分两组,分别加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升的标准蛋白质溶液,用水补足到1毫升,然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后,在室温(20~25℃)下放置30分钟,于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的首支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值,以蛋白质的含量为横座标,光吸收值为纵座标绘制标准曲线。
2、样品的测定:取2~3个试管,用上述同样的方法,测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。
folin―酚试剂法早先是由lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,缺点是费时间较长,要准确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳(1%),NaNO浓度(1%),TCA(0.5%),乙醇(5%),C4H10O(5%),CH3COCH3(0.5%)等溶液对显色无影响,但这些物质浓度高时,必须作校正曲线。含硫酸铵的溶液,只须加浓碳酸钠―NaOH溶液,即可显色测定。若样品酸度较高,显色后会色浅,则必须提高碳酸钠―NaOH溶液的浓度1~2倍。
胰蛋白酶与胰酶的区别
胰酶与胰蛋白酶的是同一种物质吗?相信很多人并不能分清两者的区别。胰酶顾名思义是由动物胰脏中提取的多种酶组成的混合物酶制剂,主要为胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶,其主要成分为胰蛋白酶。要想更深入的了解两者的关系,我们先从人体内zui重要的器1官胰脏说起。
胰1腺分泌出的胰液含有胰蛋白蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶,主要成分为胰蛋白酶,属肽链内切酶。胰脏是我们身体上一个非常不显眼的小器1官——胰脏,胰脏有两部分,一是胰1腺,是外分泌腺,产生胰液;二是胰岛,是内分1泌腺,产生胰岛素,胰1腺分泌出的胰液经胰管输入到十二指肠,胰液含有胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶等多种物质,可作用于肠道分解蛋白质、脂肪和糖的作用。
胰蛋白酶是由胰1腺分泌的一种蛋白水解酶,在动物中作为消化酶而起作用,主要作用于精氨酸或赖氨酸羧基端的肽键,蛋白质分解为氨基酸、氨基酸多肽等,再被人体肠道吸收到人体各组织中去,所以胰蛋白酶在食物消化中起到至关重要的作用。

原子数由m个氨基酸,n条肽链组成的蛋白质分子,至少含有n个—COOH,至少含有n个—NH2,肽键m-n个,O原子m+n个。分子质量设氨基酸的平均相对分子质量为a,含b个二硫键,蛋白质的相对分子质量=ma-18(m-n)-2b基因控制基因中的核苷酸 6信使RNA中的核苷酸 3蛋白质中氨基酸 1。蛋白质是由C(碳)、H(氢)、O(氧)、N(氮)组成,一般蛋白质可能还会含有P(磷)、S(硫)、Fe(铁)、Zn(锌)、Cu(铜)、B(硼)、Mn(锰)、I(碘)、Mo(钼)等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约为:碳50% 氢7% 氧23% 氮16% 硫0~3% 其他微量。
(1)一切蛋白质都含氮元素,且各种蛋白质的含氮量很接近,均为16%;
(2)蛋白质系数:任何生物样品中每1g元氮的存在,就表示大约有100/16=6.25g蛋白质的存在, 6.25常称为蛋白质常数。
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