广州硕谱生物科技有限公司,SPE小柱,是目前国内生产SPE小柱较好的生产厂家。mcx固相萃取柱
固相萃取(Solid Phase Extraction,简称 SPE)是一种以液-固色谱分离为基础的前处理技术,可对目标化合物进行选择性吸附和选择性洗脱。按保留机理,力主要分为无极力作用、极力作用、离子交换(静电吸引)。
反相态是 SPE小柱中相对于流动相极性较低的分
mcx固相萃取柱
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固相萃取(Solid Phase Extraction,简称 SPE)是一种以液-固色谱分离为基础的前处理技术,可对目标化合物进行选择性吸附和选择性洗脱。按保留机理,力主要分为无极力作用、极力作用、离子交换(静电吸引)。
反相态是 SPE小柱中相对于流动相极性较低的分离态。本发明主要利用固定相官能团的碳氢键和目标化合物的碳氢键之间的非极性作用力,适合从极性基质中提取分离非极性和中极性的目标物。
对由非极性力吸附到反相 SPE柱上的目标物,可用弱极性溶剂,如氯1仿、环己1烷、乙1酸乙1酯等洗脱。只有当溶剂的洗脱强度足够大时,才能使目标物与吸附剂之间的范德华力破坏,使目标物从 SPE柱洗脱。即使是极性更强的甲1醇,对许多化合物而言,也有足够的非极性力量来洗脱它。有时候,单种溶剂无法洗脱疏水性强的目标物,可以考虑使用二1氯甲1烷:乙1酸乙1酯(1:1,体积比)。
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正相填充(Silica,NH2, CN, Florisil, Diol, Carb,Alumina-N, A, B)
*分析物:中等极性至强极性
*基质:从非极性到中极性
·方法:
(a)激1活:非极性有机溶1剂(通常由上样液所在的有机溶1剂激1活)
(b)洗脱:非极性有机溶1剂(一般是上样液所在的有机溶1剂)
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相对于弱酸性化合物而言,弱碱性化合物在阳离子交换固相萃取过程中99%的分解都是阳离子,这一弱碱性化合物所处的环境系统的 pH值必须其 pKa至少两个 pH单位。洗脱时,环境体系的 pH值应高于化合物的 pKa值至少两个 pH单位,99%的化合物此时为中性状态,可通过适当的溶剂从阳离子交换柱中洗脱。
选择离子交换固相萃取柱的种类:为能有效地洗脱吸附在一起的离子化合物,对于含有强离子官能团的目标化合物,一般选用弱离子交换柱;对于含有弱离子官能团的化合物,一般选用强离子交换柱。该方法可避免目标化合物与吸附剂官能团同时处于离子化状态,使目标化合物始终保持在不能洗脱的保留状态。
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有时,强溶剂 B也不能除去色谱柱中残留的污染物。然后需要使用更强的溶剂或混合多种溶剂。若污染物不是生物质,一种强溶剂或多种溶剂的联合清洗基本上可以解决这个问题。圆柱制造商的网页和产品说明书中也有许多清洁方法的建议。各种清洁方法的模式通常相似,溶剂系列中使用的溶剂的强度逐步提高,zui后一种溶剂往往非常具有非极性(疏水性)(例如乙i酸乙i酯甚至是烷烃),以便于将脂质、油等非极性污染物溶解。每一种溶剂在一个溶剂系列中保证与另一溶剂互溶。在整个清洁过程结束后,在返回到原来的流动相系统之前,必须要通过一种强度适中、互溶性很好的溶剂过渡。举例来说,异丙i醇是一种很好的过渡溶剂,它可以与正己烷或二氯甲i烷以及水相中的溶剂互溶。但异丙i醇粘度很大,必须保证低流速,以免使泵压过高。
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在填充压实后, SPE小柱的填料形成柱床,当溶剂流过小柱时,速度过快会产生两个问题:一是对粘结相填料而言,由于流速过快,使其不能充分浸润舒展,从而导致其保留活性降低;二是过快的流速会使小柱形成沟槽,使小柱没有充分浸润,从而减少吸附填料与样品的接触面积,影响目标物质的传质过程,从而降低回收率。
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当柱流速度为0-3.0 mL/min时,由于横截面积较大,柱床较低,沟槽效应较小,因而适用于高流速条件下的大体积水样的富集;当离子交换和特定吸附作用时,填料和分析靶物的作用时间较长。
在离子交换小柱中,保持目标物质的离子化而不是分子态是关键,而在离子交换小柱的交换机理中,则与其实验结果直接相关。对硅胶键合C18小柱的萃取,由于硅胶(SiOH)不能完全“封口”,当 pH大于4.0时,硅胶都会带负电,从而使能电离的化合物与硅胶发生作用,加强了这一次个作用理(主要作用力是非极性相互作用力),使这类物质对硅胶-C18的保持力增强。
均衡(Equilibrium):去除活化溶剂为上样创造合适的溶剂环境,使用的溶剂通常与样品溶液的溶剂一致;对于离子交换柱来说,样品在碱性化合物平衡液中经常需要添加酸,在酸性化合物平衡液中经常需要添加碱;保留(Retention):样品溶液在吸附剂作用下,吸附剂对某些化合物的作用超过了其对溶剂的作用,这一过程称为保留。
浸渍:上样后,部分干扰物与目标化合物同时被保留,因此需要加入适当的溶液来大限度地去除干扰物而不影响目标化合物的保留,通常使用上样溶剂进行浸渍不会影响回收率,但洗脱强度较人的溶剂能大限度地去除干扰物,选择淋洗液时需要在回收率和净化效果之间找到平衡;