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冻存袋的原理

细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以较大限度的保存细胞活力。如今细胞冻存多采用甘油或DMSO作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

细胞复苏冻存袋

1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；

3. 离心， 1000rpm，5min；

4. 弃去上清液，加入含10%小牛血培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；

5. 次日更换一次培养液，继续培养。

冻存袋注意事项

可用于细胞在-196℃液氮中的存储和转运。所有冻存袋都是无菌即用型包装。冻存袋对于大量细胞的冻存非常方便，但使用过程中还有些小地方需要注意。较大冻存体积的推荐是参照冻存袋平放，液体厚度8mm时液体的体积。增加冻存液体的量，冻存袋到是能装下，但细胞复苏的时候就麻烦了，液体厚度太大，融化所需时间太长，细胞活率要受很大的影响啊！