基因枪法的优点是无宿主限制,受体类型广泛,操作迅速、简单,能有效地转化质体。由于取材广泛,金属微粒的喷射面广,转化频率高,所以具有广泛的应用前景。缺点是转化的DNA部分片段太大时DNA部分片段容易断裂,基因枪转化过程中,同源序列可通过DNA-DNA、DNA-RNA、RNA-RNA的相互作用,导致转录或转录后水平的基因沉默。另外,外源DNA往往成簇地整合到受体基因组中,而且可能以
腺病毒相关载体
基因枪法的优点是无宿主限制,受体类型广泛,操作迅速、简单,能有效地转化质体。由于取材广泛,金属微粒的喷射面广,转化频率高,所以具有广泛的应用前景。缺点是转化的DNA部分片段太大时DNA部分片段容易断裂,基因枪转化过程中,同源序列可通过DNA-DNA、DNA-RNA、RNA-RNA的相互作用,导致转录或转录后水平的基因沉默。另外,外源DNA往往成簇地整合到受体基因组中,而且可能以多种方式发生重排,所以转化体中的外源基因常常是多拷贝的。但对于这些不足,目前已有研究者在研究其机理并寻求解决办法。

腺病毒是如何构成的
病毒滴度滴定(组织培养半数感1染量TCID 50):将分装好的病毒液接种一长满单层Hep-2细胞的96孔板,第yi列每孔加25μl病毒液,作1/lO 稀释,此后依次作倍比稀释,每稀释度接种8孔,zui后一列做阴性对照.对照孔和感1染病毒孔均加入100μl维持液,置37℃ 、5%CO2 培养箱中培养。每天观察并记录出现CPE的孔数及具体时间,待细胞病变不再发展后,观察记录结果,用Reed-Muench法计算病毒滴度TCID 50。
转1基因技术是伴随着对生物体的认识才发展起来的技术,在生物本身还未完完全全地认识的情况下进行基因层次的修饰,出现预料不到的结果和不确定性与不能解释的情况是肯定的。其造成各种不确定性的来源包括: 基因从原有机体转人宿主有机体中,两者的生理的差异对终产物影响而导致的安全性问题。
转移的基因结构的稳定性。确保经遗传修改的生物已获得要表达良性性状所需的zui小DNA部分片段,由于DNA结构的稳定有助于性状表达的稳定,额外的DNA部分片段可能导致基因沉默或终产物的表达不稳定,甚至产生不需要的性状或有毒物质。 基因插人受体基因组的位置和拷贝数的不确定性。无论是农杆1菌介导法、基因枪法、花粉管通道法、PEG介导电1击法等,质粒在进人宿主基因组的位置与数量均是不确定的,目的基因的表达量难以预料,同一批的转1基因材料可能存在差异。
转1基因载体引起的不确定性。食用具抗生1素耐药性的选择性标识基因可能会影响人的抗病能力。Netherwood等分别让7个肠道炎的和12个健康的志愿者食用添加转1基因大豆(EPSPS)的汉堡和豆奶昔,虽然在12个健康个体的粪便中没有发现转1基因,但在7个肠道炎志愿者的xiao肠中都发现了转1基因,其中的3个出现有转1基因向肠道微生物转移的现象,即有可能抗生1素标记会转移到肠道微生物上。
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