ELISA试剂盒的试验原理
试剂盒是固相夹心法酶联吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
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ELISA试剂盒的试验原理
试剂盒是固相夹心法酶联吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
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Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案
现白板,阳性对照不显色
1 显色液变质 更换新的显色液
2 洗涤液配制有误 请按说明书所示稀释倍数配制
3 未加酶结合物而认为已加入 注意不要漏加
4 终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用 每次加液前均应看清标签
5 标准品稀释方法错误/或标准品有问题 请按照说明书所示配置说明书,注意单位和稀释倍数
6 不同试剂盒或不同批号的试剂混用 建议使用同批次试剂盒。不能混用不同试剂盒或不同批号的试剂。
不正常的标准曲线
1 错误的方法重悬标准品 加入正确量的溶液重悬标准品,重悬充分
2 标准品稀释错误 按照说明书要求稀释标准品
3 标准品污染 使用一次性的灭菌吸头, 标准品贮存于2-8 ℃
4 错误的倍比稀释步骤 按照说明书倍比稀释标准品
5 波长选择错误 TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用,而 前者比色波长为450nm,后者为492nm。双波长比色分析优于单波长。
6 标准品混用 不同批号试剂勿混用
7 试剂盒在运输途中时间太长,温度太高,标准品失活 尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温
8 ELISA未终止而直接检测450nm和620nm TMB显色需终止后检测,否则会出现620nm比450nm读数高的现象。(数值仍有梯度规律)
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