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制备色谱能当分析色谱用吗?
制备色谱与分析色谱差别较大在于精度。制备色谱为了获得分离物质的纯度和量,适当的放弃了对于精度的苛求。制备色谱当做分析色谱用,应该针对具体的样品情况而定。样品较易分离时,制备色谱还是可以当分析色谱使用。分析色谱:在乎分析结果,对化验结果的纯度,比例等要求准确,而对收率,浓度等产品参数
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制备色谱能当分析色谱用吗?
制备色谱与分析色谱差别较大在于精度。制备色谱为了获得分离物质的纯度和量,适当的放弃了对于精度的苛求。制备色谱当做分析色谱用,应该针对具体的样品情况而定。样品较易分离时,制备色谱还是可以当分析色谱使用。分析色谱:在乎分析结果,对化验结果的纯度,比例等要求准确,而对收率,浓度等产品参数不在乎,一次进料,而且每次进料少;制备色谱:比较在乎高效能得到纯化物质。
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制备色谱到底是什么?
固定相的选择,硅胶、键合固定相(如C18)、离子交换树脂 、聚酰胺、 氧化铝、 凝胶等都可以作为色谱柱的填料。 有不少文献报道,对填料可以进行一下处理提高了分离效果,如,对硅胶进行的(或缓冲液)处理。装柱方法的选择:根据固定相颗粒度和柱子的尺寸,采用不同的装柱方法,往往装填越好分离效果越好。装柱效果跟填料的颗粒度关系很大,颗粒度的减少会导致装柱的难度。一般来说,颗粒直径小于20-30um的固定相采用湿法装填。所谓“敲击-装填”技术适用于颗粒直径大于25um的固定相。湿法的目的是迫使相对稀松的 固定相悬浆以高速装入色谱柱子,从而减少空隙的形成。然而,当柱直径大于20mm,所加压力为30-40bar时,高压悬浆装填技术就变得十分复杂。为将小颗粒固定相装入更大得制备型色谱柱,可采用柱长压缩技术。这种方法,先将固定相悬浆(或偶尔是干填充物)装入柱中加压,利用物理方法将其压紧。压紧的方法有两种:径向压缩和轴向压缩。 湿法装柱需要一定的设备,在柱子填完后,应用有柱效的测量,对柱效低的柱子应该重填。
问:TFA在缓冲液中是不是只起到调节pH的作用呢?TFA的浓度越高基线的漂移越厉害,那是不是说它的浓度在缓冲液pH允许的情况下越低越好呢?
答:(1)TFA起到类似离子对的作用,一般浓度在0.05-0.1%,过高的浓度,会使溶液偏酸,长时间使用可能影响柱子寿命。
(2)同时TFA可以抑制硅胶表面硅醇基,改善碱性化合物的峰型。有时0.1%TFA分离不好的话。可以考虑加大浓度到0.2%。但要注意用完后及时冲洗色谱柱。
(3)走梯度时,因为走成基线漂移,但对制备的影响不大。
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