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不计空白梯度洗脱…为保证良好的重复性，梯度洗脱的溶剂纯度要求较高。由于弱溶剂中的杂质在色谱柱上被强溶剂洗脱，在分析样品之前，必须对样品进行空白梯度洗脱，识别溶剂杂质峰。分级洗脱溶剂需要完全脱气，以防止在混合过程中产生气泡。没有注意到溶剂混合引起的粘度变化…由于混合溶剂的粘度随组
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不计空白梯度洗脱…为保证良好的重复性，梯度洗脱的溶剂纯度要求较高。由于弱溶剂中的杂质在色谱柱上被强溶剂洗脱，在分析样品之前，必须对样品进行空白梯度洗脱，识别溶剂杂质峰。分级洗脱溶剂需要完全脱气，以防止在混合过程中产生气泡。没有注意到溶剂混合引起的粘度变化…由于混合溶剂的粘度随组分而变化，因此，在梯度洗脱过程中常常会发生压力变化。比如，和水的粘度都比较小，当它们以相似比例混合时，粘度增加很大，这时的柱压比或水为流动相时大一倍。所以在梯度洗脱时要注意防止压力超过输液泵或色谱柱可以承受的大压力。
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六通阀的正确使用与维修：①样品进样前，要用0.45μ的滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。②旋转阀芯时不要太慢，不要停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力急剧上升，甚至超过了泵的大压力；再转到进样位置，过高的压力会使柱头损坏。③为了防止进样阀内的缓冲盐及样品残留，每次分析结束后应冲洗进样阀。一般可采用清水冲洗，或先用溶样溶剂冲洗，再用清水冲洗。色谱柱的使用与维护色谱柱的正确使用与维护非常重要，一不小心就会降低柱效，缩短使用寿命，甚至损坏。为了维护色谱柱，在进行色谱分析时，必须注意以下问题。
起因：①在线过滤堵塞②泵头下订单向阀堵住③检测池很脏，也有可能是光路有些堵，再不行可能是灯寿命到了④抹布脏了，需要更换。对策：①在线滤网卸下，置烧杯，加纯化水煮沸5-10分钟后，超一下一般就可以了，如果还堵的话就拿稀泡，还不行，就换新的，这是个消耗品②将泵头下端向阀卸下，两个都可能堵死，刚卸下来时竖在耳边摇晃就听不到声音了。只需简单地拿起洗耳球将单向阀吹一下(方向)，吹了没反应可以拿溶剂超声，但不可用水煮，一般超至在耳边摇动声音就不会影响到。③先用溶剂将检测池冲洗一下，具体的试样用什么试样；若不冲洗，将检测池卸下，看灯能量，若能量还可以(有个几千)，可能得清洗光路。首先还是请工程师来清洗，因为要清理的零件在探测器下面有一个黑色的碎片，中间有一条缝，而且那一块的螺丝都是八角的，卸起来很麻烦。
④拿出5个样品盘，可以看到里面有一个黑色凸起(看不清是用电筒)，平时进样针就是从那个地方吸的。伸手就能卸下来，里面有一个小白圈(用多了自然就黑了)，换一个新的就好了，一般只有10个才能买仪器。在使用过程中，液相色谱有四个主要要素需要注意：1.液相色谱仪本身：通常仪器本身是没有问题的，尤其是新买回来的仪器。就仪器本身而言，的是仪器的检验，新买回来的仪器一般都是由卖方先对仪器做系统的确认工作(包括 IQ、 PQ、 OQ)，确认顺利通过后，再请或省级仪器检定局的来校验，检定合格后再用，检定合格后再用，除此之外，还可以放心使用，此外，还可为仪器的正常使用提供保障。
样品分析时，是否遇到过不均匀性差、数据分析有杂峰？碰到这样的情况，很多小伙伴首先就会分析实验的过程、实验方法是否正确，但其实步应该先看看进样瓶瓶盖是否拧正。由于错误的拧盖或压盖(针对钳口瓶)也会对色谱分析产生干扰。见到这儿，相信大家都是一脸的问号。别不信，因为试验检测结果表明，进样瓶盖拧得太紧会增加杂峰的风险。
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1.盖过紧如果盖太紧，隔垫很可能会出现明显的内凹现象。越扭越紧，隔垫内凹的情况就越严重。这时，垫子处于一种非常紧绷的状态。这一紧绷状态可能会导致：当色谱扎针进样时，会增加隔垫碎屑的几率，造成色谱分析不准确，样品平行性差等问题。下面的图表是GS-MS在隔板扎针后的测试谱对比，样品瓶中的溶剂是。黑线为溶剂空白谱图，蓝色曲线是盖子正确上紧的谱图，玫红色曲线是压盖过紧的封盖。很显然，将盖子拧得过紧的试样会有较多的硅氧烷峰(注意：概率不是)，硅氧烷峰更多说明有隔垫碎屑掉入瓶中。用肉眼观察的样品瓶未见隔垫碎屑，说明隔垫碎屑很小。1.盖过紧如果盖太紧，隔垫很可能会出现明显的内凹现象。越扭越紧，隔垫内凹的情况就越严重。这时，垫子处于一种非常紧绷的状态。这一紧绷状态可能会导致：当色谱扎针进样时，会增加隔垫碎屑的几率，造成色谱分析不准确，样品平行性差等问题。
一般情况下，更换活塞密封垫后，应按照密封垫安装的步骤进行磨合，但不能用在正相密封垫上。☆当泵头安装有柱塞清洗附件时，由于该附件中还设有密封垫，因此活塞杆运动时的阻力将增大。因此在开泵之前，一定要用10%的异，并把它的流速调到大约2-3滴/分钟，使溶液流过冲洗装置。(对 SL泵来说，如果不用盐溶液即可)10%异可以帮助降低水的表面张力，具有抑制细菌的作用。请勿使用其他溶剂。如果泵头没有打开10%异，安装冲洗附件，就会缩短密封垫和活塞杆的寿命(除二元泵 SL外)，泵头如果发出“吱吱”声不影响使用和泵的精度，可改变压缩因子(compressibility)。
自动进样器样本必须在进样前进行适当的预处理，要经过亚微米级滤膜的过滤或离心，以防止样品中的微小颗粒堵塞管道，好是用流动相作为配制样品的溶剂，该溶剂对样品应具有良好的溶解性能。当喇叭口朝上暴露在空气中时，有时空气中较大的尘埃颗粒碰巧落在针座的流道内，导致针座堵塞。此时可试着将针座卸下来，把它接在泵出口上反冲，一般可以解决问题。如缓冲液频繁使用， ALS计量泵除泵头外的柱塞和密封圈，应定期清洗六通阀的转子密封圈和定子密封圈，防止有盐粒子磨损 ALS必须使用 Agilent的样品瓶及瓶盖；使用不兼容的或加工精度差的样品瓶及瓶盖，会导致 ALS故障率上升，并降低产品性能。
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