武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳
Arf3antibody
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。
NewEast Biosciences Arf6激l活检测试剂盒基于特定于配置的单克l隆抗l体和Arf6特异性兔多克l隆抗l体,该抗l体特异性识别Arf6-GTP,但不能识别Arf6-GDP。 鉴于单克l隆抗l体对其抗原的高度亲和力,可以在短时间内进行激l活测定。 该测定法可提供可靠的结果,并具有一致的可重复性。
1.抗活性Arf 6,小鼠单克l隆抗l体(货号26918):一小瓶– 22 μL(1
含50%甘油和0.05%叠氮l化钠的PBS(pH 7.4)中的浓度(mg / ml)。 该抗l体
特异性识别所有脊椎动物的Arf 6-GTP。
2.蛋白A / G琼脂糖(目录号30301):一小瓶– 400 μL 50%浆液。
3. 5X测定/裂解缓冲液(目录号30302):一瓶– 30 mL的250 mM Tris-HCl,pH 8,750mM NaCl,50 mM MgCl2,5 mM EDTA,5%Triton X-100。
4.抗Arf 6,兔多克l隆抗l体(货号21032):一小瓶– 100 μL(1 mg / ml)
pH 7.4的PBS中含有50%的甘油。
5. 100 XGTPγS(目录号30303):1瓶– 100 μl,10 mM,使用5 μLGTPγS标记0.5 mL细胞裂解液。
6. 100 X GDP(产品目录号30304):一个样品瓶– 100 μl,100 mM,使用5 μL GDP标记0.5 mL细胞裂解物。
免l疫印迹和检测(所有步骤均在室温下搅拌)
1.在电印迹步骤之后,将PVDF膜浸入100%甲l醇中15秒钟,然后使其在室温下干燥5分钟。
注意:如果使用硝l酸纤维素代替PVDF,则应跳过此步骤。
2.在室温下不断搅拌下,在TBST中用5%脱脂奶粉或3%BSA封闭膜1小时。
将膜与抗Arf 6兔多克l隆抗l体在5%脱脂奶粉或3%BSA / TBST中以1:501000(取决于样品中Arf 6蛋白质的量)新鲜稀释,孵育1-在室温下持续搅拌2小时或
过夜4oC。
3.用TBST将印迹的膜清洗3次,每次5分钟。
4.将膜与二抗(例如山羊抗兔IgG,HRP偶联物)一起孵育,在室温下以恒定的比例在5%脱脂奶粉或3%BSA / TBST中以1:1000的比例新鲜稀释。搅动。
5.用TBST将印迹的膜清洗3次,每次5分钟。
6.使用您选择的检测方法,例如ECL。
Arf样蛋白1(Arl1)是GTpases的Ras超家族中的调控性GTPases Arf家族的成员,并且在整个真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 Arl1对果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育至关重要。 Arl1在主要序列,细胞定位和功能(膜运输调节)上与Arf1-6较相似,甚至共享几个共同的结合伴侣。 除了其在高尔基体/反式高尔基体网络中的膜运输功能中,还有报道表明Arl1在酵母中的离子稳态中可能发挥作用。
Arf6激l活测定。 经GDP(lane1)或GTPγS(lane 2)处理后,纯化的Arf6蛋白被免l疫沉淀。 用抗活性Arf6单克l隆抗l体进行免l疫沉淀。
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