基因枪转化法
气动式基因枪中具有代表性的是PDS-1000/He,利用由不同厚度的聚苯四甲酰亚1胺膜制成的可裂圆片来调控氦气压力。当氦气压力达到可裂圆片的临界承受压力时,可裂圆片破1裂并产生强烈的气流,使微弹载体携带微弹高速运动,遇到刚性的阻挡网,微弹载体被阻遏,而微弹利用惯性继续向前高速运动,轰击靶1细胞或组织,从而携带外源基因进入细胞内。基因枪法不再受到受体基因型
腺病毒载体
基因枪转化法
气动式基因枪中具有代表性的是PDS-1000/He,利用由不同厚度的聚苯四甲酰亚1胺膜制成的可裂圆片来调控氦气压力。当氦气压力达到可裂圆片的临界承受压力时,可裂圆片破1裂并产生强烈的气流,使微弹载体携带微弹高速运动,遇到刚性的阻挡网,微弹载体被阻遏,而微弹利用惯性继续向前高速运动,轰击靶1细胞或组织,从而携带外源基因进入细胞内。基因枪法不再受到受体基因型的限制,又能避开原生质体再生的障碍,从而使植物的遗传转化翻开了新的一页。
基因枪转化法在植物遗传转化中的应用:应用基因枪法转化zui早的是Klein等人在1987年将携带有细菌氯霉1素乙酰转移酶(cat)基因的烟1草花叶病毒的RNA导入洋葱的表皮细胞,使此基因得到表达。后来,随着对物理参数(如金属粒子的理化特性、DNA与金属粒子的结合和靶组织特性等)、环境条件(如受体植株、外植体和靶组织所适宜的温度、湿度和光照等)和生物因子(如外植体及其轰击前后的培养条件等)等的技术优化,不断完善的基因枪转化技术能实现对许多受体材料的转化,包括原生质体、悬浮细胞系、愈伤组织、外植体(幼穗、幼胚或成熟胚),甚至可以直接轰击转化花粉。
腺病毒的研究简史
腺病毒对啮齿类动物有致癌能力,或能转化体外培养的啮齿类动物细胞。使细胞转化只需要腺病毒基因组的一部分,这些基因位于基因组的左端,约占整个基因组的7%~10%。尽管腺病毒分布很广,但对人体不出现致癌性。人体细胞是一类允许细胞(permissive cell),即这类细胞允许感1染入1侵的病毒在细胞内copy增殖,zui后细胞裂解died而释放出大量1子代病毒。在体外培养的多种人体肿1瘤细胞中均未查出腺病毒颗粒,但在人的1号染色体上有adl2的整合位点,这意味着人体细胞对于腺病毒也可能是非允许细胞,即这类细胞在病毒感1染后,病毒不能在细胞内copy增殖,但可整合在受感1染细胞的基因组内。这些细胞被病毒转化,表型发生改变,且可在体外期地培养传代。
腺病毒感1染后可获得对同型的持久免1疫力
与绝大多数呼吸道感1染的病原相比,机体对腺病毒的再感1染能产生有效的免1疫。起保护作用的是体内产生的循环中和抗1体。正常的健康成人一般也具有多型的抗1体。约40%~60%的6~15岁的人具有1、2和5型中和抗1体,但3、4和7型抗1体很少。母亲的抗1体能保护婴儿免除严重的腺病毒呼吸道感1染。
PCR核酸检测实验室布局建设
核酸检测前的生物安全防护(工作人员个人三级防护的穿戴)
1、穿戴流程:在基因扩增实验室的清洁区(更衣区)或者普通实验室的洁净区,工作人员按顺序依次穿戴好一次性帽子、医1用N95口罩、一次性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防护目镜和双层乳胶手套,进入样本处理工作区域或实验室。
2、要点提示:
2.1、具备标准基因扩增布局条件的实验室,应在清洁更衣区做好个人三级防护,条件有限的实验室亦可选择在一洁净的实验室中按流程穿戴好个人三级防护。
2.2、需佩戴医1用N95口罩,若无医1用N95口罩,可以考虑用普通N95/KN95口罩外加一次性外1科口罩的组合方式,但不要佩戴有呼吸阀的N95口罩。
2.3、佩戴N95口罩时需检查密闭性,通过双手按压、深呼吸、左右转头等动作严格检查口罩是否佩戴正确。
2.4、一次性防护服已具备新型冠状病毒核酸检测的防护需求,有条件时可以考虑加穿一次性反穿隔离衣,穿衣时需由他人协助。
2.5、穿戴整齐的工作人员,应按要求尽快进入样本处理的实验区域开展工作,严禁穿戴三级防护后再进入普通实验区域或办公区域。
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