亲和柱介绍
生物分子之间的亲和识别包括抗体和抗原、酶和底物和受体等之间的亲合作用,这些亲和作用属于生物专一性识别;此外,某些物质和生物大分子之间还有一些特异性作用,如染料和某些酶(特别是脱氢酶和激酶等),植物凝集素和糖蛋白,金属离子和蛋白质表面的组氨酸等之间的作用,都可以应用于亲和分离过程。
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亲和柱介绍
生物分子之间的亲和识别包括抗体和抗原、酶和底物和受体等之间的亲合作用,这些亲和作用属于生物专一性识别;此外,某些物质和生物大分子之间还有一些特异性作用,如染料和某些酶(特别是脱氢酶和激酶等),植物凝集素和糖蛋白,金属离子和蛋白质表面的组氨酸等之间的作用,都可以应用于亲和分离过程。
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亲和柱的应用
应用:牛奶中M1的测定
(参考方法GB 541337-2010 食品安家标准 乳和乳制品中M1 的测定)
样品前处理
称取50g牛奶到具塞离心管中,在水浴中加热到35-37℃,4000转离心15min,除去上层乳脂,全部样品待过柱净化
样品过柱净化
1. 将亲和柱(SBHL-20-0245)连接于10ml或50ml注射管下。
2. 将处理好的样品全部通过亲和柱,控制试样以2mL/min-3mL/min稳定的流速过柱。(注意:空气不能通过柱体)
3. 以稳定的流速淋洗柱子两次,弃去全部流出液,并使2mL-3mL空气通过柱体。
4. 洗脱,流速为1mL/min-2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。
亲和柱的特点及使用注意事项
特点:
特异性强,柱容量大;
简单,方便,安全,环保。
注意事项:
1、2-8℃保存,使用前需要回温到室温24-28℃,较佳温度25℃。
2、复杂基质如高蛋白、高油脂、酸性样品可将提取液分两次提取提高提取效果。
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目前,于黄曲霉毒素分离纯化的固相萃取产品有两类:
一是亲和柱(IAC)[sl,它是将特异性的AFT抗体与适当的固定相结合填柱而成,特异性强,灵敏度较高。
二是多功能净化柱(MFC)它是一种特殊的SPE柱,以极性、非极性及离子交换等儿类基团组成填充剂,可选择性吸附样液中的脂类、蛋白类等杂质,AFT不被吸附而直接通过,MFC的操作更为简便,不需要进行活化、淋洗和洗脱操作只需直接上样,10秒钟内即可完成整个净化过程,净化效果理想。
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