小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立
细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破 骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant
流式细胞
小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立
细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破 骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一 步采用RT- PCR对破骨细胞标志酶基因基质金属蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和组织蛋白酶K (Cathepsin K )的表达进行检测结果共培养5天后可观TRAP(+)多核细胞形成13天TRAP(+ )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志基因TRAP在共培养3天时开始表达,而MMP-9和Cathepsin K则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著诱导的破骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.
细胞检测服务
作为生物体结构和功能的基本单位,细胞在机体的各项新陈代谢的生命活动中发挥着重要的作用,与此同时,细胞的生理过程,在一定程度上也是机体生命活动的反应。因此利用多种精密仪器,结合特异性的检测试剂,对体外培养的细胞直接检测其增殖的基本过程,或对细胞进行不同的处理后检测细胞生活周期内各项指标的变化,从而深入揭示细胞新陈代谢的具体机制。细胞分化细胞分化是指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程,其结果是在空间上细胞产生差异,在时间上同一细胞与其从前的状态有所不同。

大鼠脂肪的分离
将手术切取的大鼠脂肪组织尽量剪碎后移至离心管,其余步骤与人脂肪的分离一致。
经手术切除获得的大鼠皮下脂肪组织消化后原代培养24 h,且肉眼观察会发现培养瓶底部贴附着一层网状薄膜,轻轻摇晃培养瓶可使这层网状薄膜从瓶壁上脱落,镜下观 察发现大部分细胞都附着于这层膜上,通过术获取的人脂肪组织消化后则无此现象。增加胶原酶的量和消化时间也无法避免,取材时的或脂肪间结缔组织未被完全消化,穿过细胞筛进入了培养瓶并沉淀于瓶底部形成的。胶原蛋白酶虽然可以特异性水解胶原蛋白的三维螺旋结构,但不会损伤其他蛋白质。处理方法是37 ℃下用胰蛋白酶 消化5 min。然后利用40 μm的细胞筛过滤后传代。(4)再次用PBS缓冲液冲洗3次,滤干,将细小的软gu块置入放有0。 根据作者的经验,每毫升手术切除的大鼠脂肪可分离基质血管成分细胞约1.81×106个。原代培养2.24×10^7个大鼠基质血管成分细胞,40 h后传代时约剩余 6.2×10^6个细胞,细胞剩余率27%。
什么是脂质体?脂质体转染的原理和步骤?
细胞转染的方法主要包括:电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等,理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等。
一、脂质体 (liome) 转染方法原理
脂质体 (liome) 转染方法原理:脂质体 ((Iiome) 作为体内和体外输送载体的工具,已经研究的十分广泛,用合成的阳离子脂类包裹 DNA,同样可以通过融合而进入细胞。使用脂质体将 DNA 带入不同类型的真核细胞,与其它方法相比,有较高的效率和较好的重复性的。25%胰酶消化,1:2传代,其后一般3-5d传代1次,选取生长良好的第三代细胞进行后续实验。
中性脂质体是利用脂质膜包裹 DNA,借助脂质膜将 DNA 导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体,DNA 并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的 DNA 自动结合到带正电的脂质体上,形成 DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。细胞实验部分设备图片公司目前拥有多项专利产品及技术,其中发明专利两项,软件著作权八项,实用新型专利三项,商标两件。
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