磁性细胞标记方式
应用MACS技术进行磁性细胞分选重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记，并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。
1、直接磁性细胞标记(Direct magnetic cell labeling)
(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是、zui特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大
基因编辑技术
磁性细胞标记方式
应用MACS技术进行磁性细胞分选重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记，并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。
1、直接磁性细胞标记(Direct magnetic cell labeling)
(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是、zui特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。
2、间接磁性细胞标记(Indirect magnetic cell labeling )
(磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞)间接磁性细胞标记需要联合使用单ke隆或者多ke隆抗ti和MACS间标微珠。未结合抗ti、生物素化抗ti或者荧光素标记抗ti均可作为一抗标记细胞,再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗,均可用于间接标记。从而使得研发或生产者不必以杂交瘤细胞为载体保留该，而可以以碱基序列的形式进行保存和传播交流、鉴定。间接标记主要在如下情况时选用:当没有直标磁珠时;需要用几种抗ti的混合物同时分选或去除多种类型的细胞;间接标记有放大作用,因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用;使用自备或者配体的磁珠分选中。( -般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。)
细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止消化。观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止消化。在长满的细胞培养板或者培养皿中，沿着中线使用移液器枪头或者其他硬物划1-3条平行的直线，去除中线的细胞，细胞在0h、12h、24h后，观察细胞往中线迁移情况，判断细胞迁移能力。一般室温消化时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37°C下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:消化液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank's液溶解，滤器过滤chu菌，4°C保存,用前可在379C下回温。胰酶溶液中也可加入EDTA，使zui终浓度达0.02%。
Q:如何避免中沉淀物的出现？
A:首先要注意正确的解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：
（1）热灭活；
（2）在 37℃ 下培养；
（3）反复冻融；
（4）γ 射线照射；
（5）长期储存在 2-8℃；
（6）在室温下放置时间过长
Q:如何去除中的沉淀？
A:如想去除这些絮状沉淀物，可以将分装到无菌离心管中，以 400g 离心，上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。
注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。
什么是脂质体？脂质体转染的原理和步骤？
细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等。
一、脂质体 (liome) 转染方法原理
脂质体 (liome) 转染方法原理：脂质体 ((Iiome) 作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，用合成的阳离子脂类包裹 DNA，同样可以通过融合而进入细胞。使用脂质体将 DNA 带入不同类型的真核细胞，与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性的。CellCountingKit-8（简称CCK-8）是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。
中性脂质体是利用脂质膜包裹 DNA，借助脂质膜将 DNA 导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA 并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的 DNA 自动结合到带正电的脂质体上，形成 DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。透射电镜自噬小体检测胰酶消化，收集作用后的细胞，离心，先将细胞块固定在2。
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