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腺病毒相关载体「在线咨询」

脂质体法   是用带正电荷的脂质体作载体携带外源基因,与带负电荷的细胞膜融合,把外源基因导入细胞。用脂质体法转化原生质体,其毒性较电1击法和PEG法小,且适于运输大分子DNA穿过质膜。   Antonelli等(1990)用该法将基因组DNA转入BMS玉米原生质体,获得转化了的再生愈伤组织,转化率高达8%。   脂质体法的优点是转化受体为单个细胞,易于筛选
腺病毒相关载体








脂质体法

  是用带正电荷的脂质体作载体携带外源基因,与带负电荷的细胞膜融合,把外源基因导入细胞。用脂质体法转化原生质体,其毒性较电1击法和PEG法小,且适于运输大分子DNA穿过质膜。

  Antonelli等(1990)用该法将基因组DNA转入BMS玉米原生质体,获得转化了的再生愈伤组织,转化率高达8%。

  脂质体法的优点是转化受体为单个细胞,易于筛选,不易形成嵌合体,对于原生质体再生能力好的植物品种,是非常好的转化方法。





腺病毒是如何构成的

病毒滴度滴定(组织培养半数感1染量TCID 50):将分装好的病毒液接种一长满单层Hep-2细胞的96孔板,第yi列每孔加25μl病毒液,作1/lO 稀释,此后依次作倍比稀释,每稀释度接种8孔,zui后一列做阴性对照.对照孔和感1染病毒孔均加入100μl维持液,置37℃ 、5%CO2 培养箱中培养。每天观察并记录出现CPE的孔数及具体时间,待细胞病变不再发展后,观察记录结果,用Reed-Muench法计算病毒滴度TCID 50。





腺病毒的结构

腺病毒含13%DNA和87%的蛋白质,病毒体分子量约为175×106。病毒基因组为线状双链DNA,大约含35kb~36kb,腺病毒12、18和31型的DNA组成中,G+C mol%zui低(48%~49%),属于对动物具有高致癌性基因型。腺病毒1、2、4、5、8等型的G+C mol%较高(61%),致癌性反而低或无。这是一种用于人腺病毒分离株的分组的标准,根据其基因同源性将人腺病毒分为A~F等6组。





腺病毒分离与鉴定

1.分离培养 标本应尽早从感1染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物,粪便和尿液等,加抗1生素处理过夜,离心取上清接种敏感细胞(293、Hep-2或HeLa细胞等),37℃孵育后可观察到典型CPE,即细胞变圆、团聚、有拉丝现象,较突出的表现是许多病变细胞聚在一起呈葡萄串状。

2.病毒鉴定 用荧光标记的抗六邻体抗1体与分离培养细胞作用来鉴定腺病毒,也可用血凝抑制(hemoagglutination inhibition,HI)试验或中和试验(neutralization test)检测属和组特异性抗原并鉴定病毒的血1清型。腺病毒可用Shell vial技术进行鉴定。病毒标本经抗1生素和离心处理,取上清接种于有细胞的Shell vial培养瓶,孵育1~2天,用特异性六邻体单克1隆抗1体对其抗原表位进行检测。也可用病1人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。用DNA杂交或内切酶酶切等鉴定分离培养的病毒DNA;PCR可用于腺病毒感1染的诊断,引物设计主要根据腺病毒六邻体、VAI和VAII编码区序列,能检测所有血1清型,而且其敏感性很高,能检测某些patient潜在的腺病毒。用腺病毒41型BgIII-D片段作探针诊断腺病毒腹泻,其检出率可达80%。






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