DNA连接酶与DNA聚合酶的区别?
形成方式不同
DNA连接酶是在两个DNA部分片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA部分片段之间形成磷酸二酯键。DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。
DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的DNA1片段上,形成磷酸二酯键。dna聚合酶起到催化剂的作用,催化原来的dna进行复1制,然后将原来的dn
DNA污染去除
DNA连接酶与DNA聚合酶的区别?
形成方式不同
DNA连接酶是在两个DNA部分片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA部分片段之间形成磷酸二酯键。DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。
DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的DNA1片段上,形成磷酸二酯键。dna聚合酶起到催化剂的作用,催化原来的dna进行复1制,然后将原来的dna和复1制以后的dna进行模板配对后,连接聚合在一起,就可以形成新的dna链。
DNA连接酶的性质
大肠杆1菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆1菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分子数相近,这也是比较合理的现象。因为DNA连接酶的主要功能就是在DNA聚合酶Ⅰ催化聚合,填满双链DNA上的单链间隙后封闭DNA双链上的缺口。这在DNA copy、修复和重组中起着重要的作用,连接酶有缺陷的突变株不能进行DNA copy、修复和重组。
制备互补DNA,往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质,则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分 [2] 。就胰岛B细胞而论,此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA,后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体,如果用特异结合所表达的蛋白质(抗原),则可从沉淀的核糖体中分离出胰岛素特异的mRNA,一般特异mRNA只是细胞总mRNA中的次要成分。在这种情况下,不得不以密度梯度离心,按分子量大小把总mRNA分开,然后把分离开的mRNA直接用于试管中表达蛋白质(用家兔网织细胞的溶胞产物或小麦胚芽提取物作为翻译系统的诱导物)再用沉淀或聚酰胺凝胶电泳从许多表达的蛋白中测定出目的蛋白,从而确定表达该蛋白的特异mRNA。
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