武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。取材与标本固定1.取材对于原位杂交所用的材料要尽可能新鲜,为了防止RNA的降解,取材要迅速,取材后要尽快固定
原位杂交技术
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。取材与标本固定1.取材对于原位杂交所用的材料要尽可能新鲜,为了防止RNA的降解,取材要迅速,取材后要尽快固定或冷冻保存。
收集斑马鱼的胚胎,在Holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小时后用50%2%多聚甲醛溶液洗,然后换成,在-20C 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用处理,去除色素。目前原位杂交技术在植物中的应用比较广泛,例如在棉花、麦类和树木等的遗传育种方面取得了显著的成就,在畜牧上原位杂交技术主要用于基因定位和基因图谱的构建以及转基因的检测和等方面。或者使用锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。杂交与显色杂交将已标记的探针加入预杂交液即成为杂交液(探针浓度为1μg/m1),切片经2×SSC短暂浸洗后,滴加杂交液,于湿盒内置37℃或42℃孵育过夜。
,杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料[1,2].FISH的基本原理是将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上,再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.FISH具有安全、、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。预杂交1)每个管中置换成大约300ulHYB-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。
切片及细胞标本的制备
载玻片的处理 因为原位杂交一般在载玻片上进行,所以载玻片必须保持清洁且不能有任何核酸酶的污染。一般载玻片可先经洗衣粉浸泡过夜,用流水冲洗、酸中浸泡4~8h,再用流水冲洗,双蒸水洗2~3次。使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针,在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交,再以自显影或细胞化学方法对标记探针进行探测,从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。在160℃烤箱中烘烤2~4h。亦可经15磅高压灭菌20min处理,可将载玻片上的核酸酶消除。

RNA原位 核酸杂交又称RNA 原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或 寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。此时可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的化学反应,经荧光检测体系在镜下对待DNA进行定性、定量或相对定位分析。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按 核酸杂交中 碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的 杂交体 (Hybrids)经 显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位杂交技术 经不断改进,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在 基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已成为有效的 分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。
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