ELISA定量测定
ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线zui高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接
RNA干扰载体
ELISA定量测定
ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线zui高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，较呈直线的部分是相对理想的检测区域。
测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线注意图中横坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达。
ELISA定性测定
定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或antibody作出'有'或'无'的简单回答，分别用'阳性'、'阴性'表示。'阳性'表示该标本在该测定系统中有反应。'阴性'则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的zui高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。
在间接法和夹心法ELISA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。
总RNA的抽提方法:
目前常用的方法是用异硫qing酸胍苯1酚抽提法。
提取步骤:
先用液氮研磨材料，匀浆，加入Trizol试剂，进一步破碎细胞并溶解细胞成分。然后加入氯1仿抽提，离心，分离水相和有机相，收集含有RNA的水相，通过异丙1醇沉淀，获得比较纯的总RNA,用于下一步mRNA的纯化。也可将含有RNA样品的细胞破碎液通过硅胶膜纯化柱纯化。
RNA浓度和纯度判断:
OD260为1时相当于浓度为50 ug/mL;
OD260/0D280值在1.8~ 2.0之间，表示纯度较好;
0D260/OD280值1.8，样品有蛋白质或酚污染;
0D260/0D280值大于2.0，提取的RNA可能有降解;
电泳后如果rRNA大小完整，而且28S rRNA和18SrRNA亮度接近2:1、mRNA分布均匀，则认为RNA。
提取DNA常用的方法
一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
四.异丙1醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙1醇替代乙醇，可去除小分子RNA(在异丙1醇中可溶状态)
五.表面活性剂制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
六.加热法制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。
七.碱变性制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。
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