原位杂交;原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交!
使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。
以菌落原位杂交为例:对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行克8隆筛选时,可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面
植物组织原位杂交
原位杂交;原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交!
使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。
以菌落原位杂交为例:
对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行克8隆筛选时,可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝5酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。
杂交液中的阳离子浓度通过静电排斥作用影响了杂交体之间的链稳定性,较高的盐浓度将增加杂交体的稳定性。大于0.4M的Na离子浓度,对Tm值、双链复性速率的影响不大,但随着Na离子浓度的降低,将显著影响Tm值和双链复性速率。
有2机溶2剂(甲酰胺)的作用是降低DNA-DNA和DNA-RNA等双链体的解链温度。通常DNA需要在0.1~0.2M Na+ 90~100℃的条件下变性,那么应用于原位杂交,样品必须在65~75℃的条件下进行长时间变性,这将导致样品形态学的破坏。50%甲酰胺的应用能将杂交温度降至30~45℃。
硫酸葡聚糖具有很强的水合性,高浓度的硫酸葡聚糖会使得核酸分子无法获得周边亲水环境,增加了探针浓度,加快杂交反应速率。
显色原位杂交 (CISH)
显色原位杂交 (CISH) 能让您利用组织学实验室中已经存在的方法在组织形态学背景下获取遗传信息。 我们提供用于CISH分析的CISH DNA探针和关键试剂。
荧光原位杂交 (FISH)
多重荧光原位杂交 (FISH) 能让您利用单一样本同时检测多个靶标并直观显示共定位情况。 使用不同光谱的荧光基团标记每种不同的杂交探针,这种方法能让您在单一样本中解析多种遗传成分或多基因表达模式,并提供多色直观显示。
在选择探针类型的同时,还需要选择标记方法。探针的标记方法很多,选择什么标记方法主要视个人的习惯和可利用条件而定。但在选择标记方法时,还应考虑实验的要求,如灵敏度和显示方法等。一般认为放0射性探针比非放0射性探针的灵敏度高。放0射性探针的实际灵敏度不依赖于所采用的标记方法,如随机引物延伸法往往得到比缺口平移法更高的比活性 。在检测单拷贝基因序列时,应选用标记效0率0高、显示灵敏的探针标记方法。在对灵敏要求不高时,可采用保存时间长的生物素探针技术和比较稳定的碱性磷酸酶显示系统。

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