转录组重测序
转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有mRNA的总和。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后jia基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在jia基化。转录组研究是基因功能及基因结构等研究的基础,通过新一代高通量测序,能够的获得某一物种特定组织或在某一状态下的几乎所有转录本序列信息,已广泛应
pcr实验室
转录组重测序
转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有mRNA的总和。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后jia基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在jia基化。转录组研究是基因功能及基因结构等研究的基础,通过新一代高通量测序,能够的获得某一物种特定组织或在某一状态下的几乎所有转录本序列信息,已广泛应用于临床诊断、基础研究和研发等领域。
转录组Resequencing针对的是有参考基因组的物种。用新一代高通量测序技术对某物种的特定组织或细胞进行转录组测序,与参考基因组比较,可以得到基因表达差异、可变剪接、融合基因等遗传调控信息。
高l效液相色谱法检验方法
高l效液相色谱法是一种现代液体色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相,用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理,得到测定结果。ceRNA是目前转录调控领域的热点内容之一,通过全转录组研究能够系统性的阐述ceRNA的分子作用机制。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相,本法具有分离性能高,分析速度快的特点。
高l效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定,特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反.应,方能进行分离或检测。LncRNA芯片Longnon-codingRNAs(lncRNAs)是一类转录本长度超过200nt的功能性非编码RNA分子。常用的色谱柱填充剂有硅胶用于正相色谱;化学键合固定相,根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱,其中常用的是十八烷基硅l烷(又称ODS)键合硅胶,可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料,用于离子交换色谱,是有一定孔径的大孔填料,用于排阻色谱。
18.引物是经过PAGE纯化的,为什么还有碱基缺失或插入?
答:理论上分析型PAGE变性电泳,可以区分引物之间一个碱基的差别。但是制备PAGE电泳,上样量都是非常大,电泳时的条带非常宽,带与带之间有重叠,分辨率已下降,电泳后割带回收目的引物时,很难说不割到差别仅几个碱基的引物。分子生物学检测技术是现代分子生物学与分子遗传学取得进步的结晶,是在人们对基因的结构以及基因的表达和调控等生命本质问题的认识日益加深的基础上产生的。国内有一个不好的现象,PAGE纯化的引物,特别是长引物要的量都比较高,导致割的条带有时可能比较宽。建议:您如果减少OD数,引物遇到的问题可能就会少一些。
19. TaqMan 探针设计的基本原则是什么?
答:下列原则供您参考。
◆TaqMan 探针位置尽可能靠近扩增引物(扩增产物50-150bp),但不能与引物重叠。
◆长度一般为18-40mer 。
◆G-C含量控制在40-80%左右。
◆避免连续相同碱基的出现,特别是要避免GGGG或更多G出现。
◆在引物的5'端避免使用G。
◆选用比较多的碱基C。
◆退火温度Tm控制在 68-70C 左右。
有用的荧光染料参数
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