自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、
病毒和细菌等。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止消化。单丹磺酰尸胺(
细胞实验室
自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、
病毒和细菌等。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止消化。单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被于检测自噬体形成的特异性标记染色剂,其检测激发滤光片波长355nm ,阻断滤光片波长512nm。Leagene MDC染色液适用于培养细胞的自噬染色，可与EB合用双染。
平板克l隆形成实验基本步骤::
1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰 蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛的DMEM培养液中备用。
2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200 个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37团5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。
3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10~30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。
4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数，或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的数。后计算形成率。形成率= (数/接种细胞数) x平板形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。其检测原理为活xi胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。平板形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞- -定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。
Q:如何避免中沉淀物的出现？
A:首先要注意正确的解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：
（1）热灭活；
（2）在 37℃ 下培养；
（3）反复冻融；
（4）γ 射线照射；
（5）长期储存在 2-8℃；
（6）在室温下放置时间过长
Q:如何去除中的沉淀？
A:如想去除这些絮状沉淀物，可以将分装到无菌离心管中，以 400g 离心，上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。
注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。
二、脂质体转染操作步骤
1、操作步骤 [方法一]：
(1) 细胞培养：取 6 孔培养板 (或用 35 mm 培养皿)，向每孔中加入 2 mL 含 1～2×105 个细胞培养液，37℃ CO2 培养至 40%～60% 汇合时 (汇合过分，转染后不利筛选细胞)。
(2) 转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液 (为转染每一个孔细胞所用的量)A 液：用不含培养基稀释 1-10 μg DNA，终量 100μL，B 液：用不含培养基稀释 2-50 μgLR，终量 100μL，轻轻混合 A、B 液，室温中置 10-15 分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染 (如出现沉淀可能因 LR 或 DNA 浓度过高所致，应酌情减量)。细胞筛选好后，使用定量PCR和Westernblot检测目的基因的稳定表达情况。
(3) 转染准备：用 2 mL 不含培养液漂洗两次，再加入 1 mL 不含培养液。
(4) 转染：把 A/B 复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃ 温箱置 6～24 小时，吸除无转染液，换入正常培养液继续培养。
(5) 其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。
注意：转染时切勿加，对转染效率有很大影响。
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