Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。3%的上层琼脂，每孔加1ml上层琼脂和100ul单细胞悬液(约1000ell/wel)，混匀，室温凝固。WST-8【化学名：2-(2-甲氧ji-4-硝ji苯ji)-3-(4-硝ji苯ji)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，是一种类似于MTT的化合物，它
细胞分化
Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。3%的上层琼脂，每孔加1ml上层琼脂和100ul单细胞悬液(约1000ell/wel)，混匀，室温凝固。WST-8【化学名：2-(2-甲氧ji-4-硝ji苯ji)-3-(4-硝ji苯ji)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，是一种类似于MTT的化合物，它在电子载体1-甲氧ji-5-甲ji吩嗪鎓硫酸二jia酯（1-Methoxy PMS）存在的情况下，被线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物（formazan）。细胞增殖越多越快，颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅，对于同样的细胞，颜色的深浅与活xi胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
大鼠shen小球内皮细胞分离培养
2.原代细胞培养:(1)shen脏原位灌洗:SD大鼠用25%乌拉坦腹整注射麻zui后仰卧固定。细胞实验介绍——流式细胞术检测细胞周期和凋亡流式细胞术检测细胞周期：细胞周期：指细胞从次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。胸腹部消森并分离胸主动脉,以无菌的冷Hank液漱朱洗血.同时剪破shen静脉利于液体流出。1-2min后shen脏色泽变白,取出双shen冰浴保存。
(2)shen小球分离:参照Green等方法改进。将灌洗后的shen脏撕下shen被膜.去除髓质后将皮质剪成约1-2mm'的碎块，轻碾shen皮质依次通过80.120和200目钢筛。收集shen小球。
(3)shen小球消化和培养；将提取的shen小球加人0.1% IN 型胶原酶消化后收集沉淀。通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PI)来区分凋亡和坏死细胞。以2x10* 的shen小球数接种于铺有1%明胶培养瓶内,加A配制好的内皮细胞培养液(MFM.Hepes 20 mmnoVL 20%胎牛xue清0. 66 U胰岛素/ml.血管内皮生长因子20 ng /ml、肝素钠100 u/ml.青莓su100 U/ml、链霉su100 μ/ml) .静止培养3 d后逐日观察shen小球的贴壁情况。待shen小球充分贴壁后常规换液.第3同进行纯化。
透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边.集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
结果评判:调亡细胞体积变小，细胞质浓缩。公司先后获得“江苏省民营科技企业”、“江苏省科技型中小企业”、“江苏省专精特新中小企业”等荣誉资质，连续多年被评为“东南大学大学科技园企业”。调亡I期( pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象( cavitati)的空泡结构; IIa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生调亡小体。
细胞培养中常见的污染及解决方法
黑点污染
黑色的游动点能穿透滤膜并在空气中扩散。同时还可以使用获得的测序结果进行专利等知识产权方面的申请审批。它们在低倍镜下显示为黑色圆点，在高倍镜下显示为可移动的黑点。培养液也不浑浊，一般影响较小，因此细胞仍可使用。通常，黑点污染后，细胞生长良好，运动物体无明显增加，培养基的颜色和透明度无明显变化。在同一批培养的细胞中也可以发现类似的现象。
解决方法：黑点对细胞生长状态没有明显影响，细胞增殖后会自然消失，因此除了置换外，无需特殊处理。如果细胞可能被小的运动点污染，建议增加培养皿细胞密度，以提高细胞存活率。
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