PCR循环参数
预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激1活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激1活时间为两分钟。
变性步骤：循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不，易造成扩增失败。
引物退火：退火温度需要从多方面去决定，一
粗提物定量PCR试剂
PCR循环参数
预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激1活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激1活时间为两分钟。
变性步骤：循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不，易造成扩增失败。
引物退火：退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。
引物延伸：引物延伸一般在72℃进行（Taq酶zui适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
循环数：大多数PCR含25-35循环，过多易产生非特异扩增。
zui后延伸在zui后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。
Hot Start PCR的原理
Hot Start PCR法是提高PCR特异性的重要方法之一。这种方法可以防止在PCR反应第yi步骤因引物的错配或引物二聚体的形成而导致的非特异性扩增，从而可以提高目的DNA部分片段的扩增效率。TaKaRa Taq Hot Start Version，TaKaRa Ex Taq Hot Start Version，TaKaRa LA Taq Hot Start Version，PrimeSTAR HS DNA polymerase，MightyAmp DNA Polymerase是抗1体和DNA聚合酶的混合制品。抗1体在高温加热前与聚合酶相结合，抑制聚合酶的活性。在PCR反应zui初的DNA变性步骤，抗1体变性，聚合酶活性恢复。
目前的病毒核酸检测试剂盒，多数采用荧光定量PCR方法，通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否含有病毒核酸。那么，核酸检测到底需要经过哪些步骤呢？概括起来，是 取样、留样、保存、核酸提取和上机检测五个步骤。
取样
采集人体的分泌物。用鼻咽拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧扁桃体处
留样
将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖
保存
将样本管放入密封袋中保存好，并及时送检
核酸提取
将样本送进实验室进行核酸提取
上机检测
将提取物进行荧光PCR扩增反应
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