细胞生物学服务
南京英瀚斯生物科技公司自建有标准的细胞培养房，配备有生物安全柜、超净工作台、细胞三气培养箱、二氧化碳细胞培养箱、荧光倒置显微镜、体视镜、、流式细胞仪等设备。细胞组技术人员毕业于东南大学、华中科技大学等高校生物学相关，具有硕士研究生以上学历，熟练掌握细胞学相关实验，可开展多种细胞实验。动物实验外包选英瀚斯生物科技有限公司。1、直接磁性细胞标记(Di
转染
细胞生物学服务
南京英瀚斯生物科技公司自建有标准的细胞培养房，配备有生物安全柜、超净工作台、细胞三气培养箱、二氧化碳细胞培养箱、荧光倒置显微镜、体视镜、、流式细胞仪等设备。细胞组技术人员毕业于东南大学、华中科技大学等高校生物学相关，具有硕士研究生以上学历，熟练掌握细胞学相关实验，可开展多种细胞实验。动物实验外包选英瀚斯生物科技有限公司。1、直接磁性细胞标记(Directmagneticcelllabeling)(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是、zui特异的磁性标记方法。
自噬流检测
自噬是调节真核细鹏生长、和能量代谢的重要生物学机制。细胞自噬行使其生物学功能的前提是自噬流的话化。大量证据表明自噬流受损与多种慢性炎性疾病，特别是、神经退行性疾病及组织纤维化的发病密切相关，目前对于自噬液的检别是自噬与其相关疾病研究领域的热点。由于自噬流是一个曲多个步骤组成的动态过程。25%胰酶消化，1:2传代，其后一般3-5d传代1次,选取生长良好的第三代细胞进行后续实验。因此往需要精细的突验才能准确判断自啦流状态。
细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止消化。观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止消化。细胞培养：然后在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板，并实时观察细胞状态。一般室温消化时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37°C下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:消化液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank's液溶解，滤器过滤chu菌，4°C保存,用前可在379C下回温。胰酶溶液中也可加入EDTA，使zui终浓度达0.02%。
2、脂质体转染法操作步骤如下 [方法二]：
(1) 以 5×105 细胞/孔接种 6 孔板 (或 35 mm 培养皿) 培养 24 小时，使其达到 50～60% 板底面积。
(2) 在试管中配制 DNA/脂质体复合物方法如下：
①在 1 mL 无 DMEM 中稀释 PSV2-neo 质粒 DNA 或供体 DNA。
②旋转 1 秒钟，再加入脂质体悬液，旋转。
③室温下放置 5～10 分钟，使 DNA 结合在脂质体上。
(3) 弃去细胞中的旧液，用 1 mL 无 DMEM 洗细胞一次后弃去，向每孔中直接加入 1 mL DNA/脂质体复合物，37℃ 培养 3～5 小时。
(4) 再于每孔中加入 20%FCS 的 DMEM，继续培养 14～24 小时，
(5) 吸出 DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜 10%FCS 的 DMEM，2 mL/孔，再培养 24～48 小时。
(6) 用细胞刮或消化法收集细胞，以备分析鉴定。
3、稳定的脂质体转染方法如下：
(1) 接种细胞同前，细胞长至 50% 板底面积可用于转染。
(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前 (2)、(3) 步骤。
(3) 在每孔中加入 1 mL、20%FCS 的 DMEM，37℃ 培养 48 小时。
(4) 吸出 DMEM，用 G418 选择培养液稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染，方法参照细胞筛选法进行。
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