流式细胞分选
流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪，以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的--种现代细胞分析技术，它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单ke隆分选，能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类
细胞实验室
流式细胞分选
流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪，以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的--种现代细胞分析技术，它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单ke隆分选，能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行超高速分选纯化、高通量单分选或细胞芯片制备。分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等，可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。25%胰酶1mMEDTA消化gao丸10min,用胎牛xue清终止消化,用一次40-um孔径的滤器过虑制成单细胞悬液,30%percoll不连续密度梯度法离心富集精原gan细胞,再根椐未分化精原gan细胞表面thy1。硬件中样本细胞丢弃的比例5%，保证样本中目标细胞的高回收率。
细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止消化。观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止消化。无论原发性zhong瘤还是继发性zhong瘤，一旦生长直径超过1~2mm，都会有血管生成。一般室温消化时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37°C下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:消化液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank's液溶解，滤器过滤chu菌，4°C保存,用前可在379C下回温。胰酶溶液中也可加入EDTA，使zui终浓度达0.02%。
细胞培养中常见的污染及解决方法
霉菌污染
正常情况下，培养基在 37℃ 培养箱中培养两三天，在倒置显微镜下仍保持透明，无杂质。一旦出现絮状杂质，显微镜下可见丝状和团块状漂浮物，菌丝明显。此时，虽然细胞仍在生长，但它们的生命状态会在长时间后逐渐恶化。
解决方法：用硫酸铜溶液擦拭 CO2 培养箱，向托盘中加入饱和硫酸铜或消毒后加入饱和磷酸氢二钠高盐溶液，避免霉菌污染。
如果霉菌污染，暂时转移所有细胞，并立即使用 guo 氧擦拭培养箱，包括层板和内壁。将 guo 氧放在培养箱中一小时，使蒸汽扩散，待 guo 氧气味消散后，将细胞转移到培养箱中。值得注意的是，培养箱需要每两个月定期清洗一次，尤其是在梅雨季节。待上层琼脂凝固后，置入37回5%CO2温箱中培养10~14天。用 84 消毒液、清水和 75% 酒精连续擦拭培养箱，用紫外线照射也是一种有效的方法。
为防止霉菌污染，需添加 3μg/ml 、抑制素、fang
线菌素 D 或青链。一旦被污染，就不可能恢复，即使使用上述，也没有什么区别。对于支原体污染的细胞培养，选择是丢弃污染的培养物，并用使用新鲜的无支原体的储存液，消毒环境。如果所有的细胞都被污染了，那可能是整个培养系统污染了。AnnexinV是Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，对PS有很高的亲和性，并且可以与暴露于细胞外的PS相结合。因此，必须对培养基和实验设备进行检查。如果只是个别污染，可能是操作问题，有必要注意实验操作步骤的规范。
选择实验外包公司需要注意哪些事项？
技术支持
尽量有专门的技术负责对接项目，或者有技术服务群。随时沟通项目问题，定期汇报实验进展。这样能把控实验进度，结果数据有疑问也可以交流，不要实验做完就没人管了。
实验数据
明确提供实验原始数据、原始图片，并有保密协议不外传数据和客户的信息。确保实验结果的完整性、唯独性、真实性。这也是找实验外包很关心的原则。另外结果尽量有实验报告形式，包含所用材料、实验步骤和结果统计分析，方便写文章时直接使用。细胞分化细胞分化是指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程，其结果是在空间上细胞产生差异，在时间上同一细胞与其从前的状态有所不同。另外实验都是有不确定性的，如果外包公司能保证一定能做出预期的结果，那多半是不靠谱的。做实验不怕出问题，的外包公司会负责到底，有问题反馈再处理就好。
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