DNA连接酶的性质
大肠杆1菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆1菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分子数相近,这也是比较合理的现象。因为DNA连接酶的
随机引物
DNA连接酶的性质
大肠杆1菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆1菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分子数相近,这也是比较合理的现象。因为DNA连接酶的主要功能就是在DNA聚合酶Ⅰ催化聚合,填满双链DNA上的单链间隙后封闭DNA双链上的缺口。这在DNA copy、修复和重组中起着重要的作用,连接酶有缺陷的突变株不能进行DNA copy、修复和重组。
据研究表明RNA聚合酶拥有现代蛋白质聚合酶的许多特征,它可以进化从而识别出RNA启动子,然后copy RNA。研究意味着,生命进化早期出现的同样的RNA酶也可能表现出如此复杂的生物学特征。
有证据表明,RNA先于DNA和蛋白质出现。例如,人体细胞内制造蛋白质的“机器”核糖体就由RNA制造而成。此外,DNA也由RNA组成。由于RNA是一种万1能工具,可以同时发挥蛋白质和DNA的功能,这表明后来进化出现的DNA和蛋白质是一种“升级”,以增强起初由RNA支持的细胞功能。昂劳实验室发现的聚合酶表明,RNA copy在原始生命体内确实可能存在。
DNA copy主要的特点是半保留copy、半不连续copy。在copy过程中,原来双螺旋的两条链并没有被破坏,它们分成单独的链,每一条旧链作为模板再合成一条新链,这样在新合成的两个DNA分子中,一条链是旧的而另外一条链是新的,因此这种copy方式被称为半保留copy。
DNA的两条链是反向平行的,一条是 5'→3'方向,另一条是 3'→5'方向。在copy起点处,两条链解开形成copy泡(replication bubble ), DNA向两侧copy形成两个copy叉(replication fork)。随着DNA的不断解旋,两条链变成单链形式,可以作为模板合成新的互补链。但是,生物细胞内所有的DNA聚合酶都只 能催化 5'→3'延伸。因此,以3 '→5'的链为模板链时,DNA聚合酶可以沿 5'→3'的方向合成互补的新链,这条链称为前导链(leading strand )。当以另一条链为模板时则不能连续合成新链,这条链称为滞后链(lagging strand )。这时,DNA聚合酶从copy叉的位置开始向远离copy叉的方向合成12 kb的新链片段,待copy叉向前移动相应的距离后,又重复这一过程,合成另一个类似大小的新链片段,这些片段被称为冈崎片段(Okazaki fragment)。zui后,由另一种DNA聚合酶和DNA连接酶负责把这些冈崎片段之间的RNA引物除去,并把缺口补平,使冈崎片段连成完整的DNA链。这种前导链的连续copy和滞后链的不连续copy在生物细胞中是普遍存在的,称为DNA的半不连续copy。
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