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液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

液相色谱操作要求

1、液相开机前先检查洗针液、柱塞清洗液是否足够； 2、液相开机后，首先确保柱塞清洗运行，再执行其它操作。 3、开机排气时，有“purge”阀的仪器应先打开“purge”阀再开泵以5ml/min的流速排气，关“purge”阀的时候先把流速降到 1ml/min再关，切不可吧顺序弄反，否则系统压力会瞬间变高。 4、使用自动进样器时，建议启用“洗针进样”方式，以降低样品残留，对于有些强残留的物质可以选择降低浓度或减小进样量。 5、液相色谱系统压力高时考虑色谱柱堵了，如果将液相色谱换成两通压力依旧高，应该考虑系统管路某部分堵了。管路堵的情况下可以使用热水清洗。对堵塞的通道可以用热水清洗。

制备型液相色谱仪

制备型液相色谱仪通常都被认为和大容量色谱柱和高流速有关联的。然而并不是以设备的大小和系统消耗的流动相的多少来决定制备液相色谱，而是依据分离目的来决定。分析液相的目的是给一种组份进行定量和定性。与传统的纯化方法比较，制备液相是一种更有效的分离方法，因此被广泛应用在样品和产品的提取和纯化上。

液相色谱是近30年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的分离分析技术。它既能用于微量组分的分析测定，又能用于大量的制备分离，灵活多样，其应用范围已超过其他各种分离方法，尤其在中药样品的分析分离方面更充分发挥它的特长，为推动该领域的进步和发展作出了巨大贡献。

什么是液相色谱

液相色谱的定义是二十世纪早期由俄罗斯植物学家 MikhailS. 茨维特提出的。他先尝试在装满颗粒的柱子上使用溶剂来分离从植物中提取的化合物(树叶色素)。茨维特用颗粒填满开口的玻璃柱。他发现两种特殊的材料，粉笔末(碳酸钙)和氧化铝很有用。他将样品(混匀植物叶的溶剂提取物)倒入柱中，并让样品流过颗、粒床。随后加入纯溶剂。随着样品由于重力自上而下流过柱子，可看到不同颜色的谱带被分开，因为有些组分比另外一些移动得快。他将这些分开的不同颜色的谱带与样品中原有的不同化合物相关联。