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pcr引物设计质粒构建「英瀚斯」

甲l基化特异性的PCR Herman 等( 1996 )在使用重亚硫酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高,主要用于作定性研究。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生jia基化的胞嘧定被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧定不变;随后设计针对jia基化和非jia基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后jia基化DNA链的引物能得到
pcr引物设计







甲l基化特异性的PCR

Herman 等( 1996 )在使用重亚硫酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高,主要用于作定性研究。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生jia基化的胞嘧定被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧定不变;随后设计针对jia基化和非jia基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后jia基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在jia基化;甲l基化特异性的PCRHerman等(1996)在使用重亚硫酸盐处理的基础上新建的一种方法。反之,说明被检测的位点不存在jia基化。

特点:适用范围广,能够检测特异位点是否发生jia基化。

亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

亚硫酸氢盐修饰后测序法( BSP ) Frommer 等( 1992 )提出的研究 DNA jia基化方法,此方法可靠性及jing确度高,能明确目的片段中每一个 CpG 位点的jia基化状态。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生jia基化的胞嘧ding被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧ding不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧定全部转化为胸腺嘧定,zui后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生jia基化,称为BSP-直接测序法。将PCR产物克long至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为BSP-ke隆测序法。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生jia基化的胞嘧定被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧定不变。

特点:jing确度高,能够准确检测出jia基化的程度百分比。










转录组重测序

转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有mRNA的总和。转录组研究是基因功能及基因结构等研究的基础,通过新一代高通量测序,能够的获得某一物种特定组织或在某一状态下的几乎所有转录本序列信息,已广泛应用于临床诊断、基础研究和研发等领域。-般:在93°C预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93°C40s→58°C30s→72°C60s,循环30-35次,后在72°C保温7min。

转录组Resequencing针对的是有参考基因组的物种。用新一代高通量测序技术对某物种的特定组织或细胞进行转录组测序,与参考基因组比较,可以得到基因表达差异、可变剪接、融合基因等遗传调控信息。











高l效液相色谱法检验方法



高l效液相色谱法是一种现代液体色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相,用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理,得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相,本法具有分离性能高,分析速度快的特点。由于线粒体有着与真核生物长期共生的进化历史,因此其基因组包含了反映物种进化的关键信息,同时,相对于核基因组,线粒体基因组小,容易对大量物种进行横向的比较分析,有利于生物进化的研究,因而受到进化生物学家的钟爱。




高l效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定,特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反.应,方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有硅胶用于正相色谱;化学键合固定相,根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱,其中常用的是十八烷基硅l烷(又称ODS)键合硅胶,可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料,用于离子交换色谱,是有一定孔径的大孔填料,用于排阻色谱。衣壳里是线状双链DNA分子,两端各有长约100bp的反向重复序列。



























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