聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA部分片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA copy,PCR的zui大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶1杀案中凶1手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国
gDNA去除反转录试剂盒
聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA部分片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA copy,PCR的zui大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶1杀案中凶1手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想,1985年由其发明了聚合酶链反应,即简易DNA扩增法,意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年,PCR已发展到第三代技术。1976年,科学家钱嘉韵,发现了稳定的Taq DNA聚合酶,为PCR技术发展也做出了基础性贡献。
PCR出现假阴性
不出现扩增条带。PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及Br乙锭的使用, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制1剂,③模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚。⑤模板核酸变性不。在酶和引物质量好时,不出现扩增带,极有可能是标本的消化处理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应 固定不宜随意更改。
基因分型
PCR可用于检测特定细胞或生物体中等位基因的序列差异。例如,基因敲除和敲入小鼠等生物的基因分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼,可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异。
但是如果为了检测特定核苷酸突变,则必须对扩增的序列进行进一步分析。例如, PCR扩增子测序就是研究单核苷酸变异(SNVs)和单核苷酸多态性(SNP)的方法之一。强烈推荐使用高保真DNA聚合酶,以防止在PCR过程中引入多余的突变。
通过PCR进行基因分型也是对癌1症和遗传病中的 突变进行遗传分析的一个基本方式。
目前的病毒核酸检测试剂盒,多数采用荧光定量PCR方法,通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否含有病毒核酸。那么,核酸检测到底需要经过哪些步骤呢?概括起来,是 取样、留样、保存、核酸提取和上机检测五个步骤。
取样
采集人体的分泌物。用鼻咽拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧扁桃体处
留样
将拭子头浸入细胞保存液中,折断尾部后立即旋紧管盖
保存
将样本管放入密封袋中保存好,并及时送检
核酸提取
将样本送进实验室进行核酸提取
上机检测
将提取物进行荧光PCR扩增反应
(作者: 来源:)