电1击法
电1击法基本原理是电脉冲使细胞膜产生可逆性的“微孔”，外源DNA可通过这些微孔进入受体细胞原生质体内。
1985年Fromm等用electric shock法将pat基因导入了玉米原生质体，得到了该基因稳定表达的愈伤组织。随着玉米原生质体再生技术的研究取得进展，1988年Rhodes等用electric shock法转化玉米原生质体，初步获得了
逆转录病毒滴度测定
电1击法
电1击法基本原理是电脉冲使细胞膜产生可逆性的“微孔”，外源DNA可通过这些微孔进入受体细胞原生质体内。
1985年Fromm等用electric shock法将pat基因导入了玉米原生质体，得到了该基因稳定表达的愈伤组织。随着玉米原生质体再生技术的研究取得进展，1988年Rhodes等用electric shock法转化玉米原生质体，初步获得了完整的转0基因植株。electric shock法还可以对幼胚、愈伤组织和胚性悬浮细胞系进行遗传转化。1992年D’Hallum K等以玉米幼胚和愈伤组织为受体，用electric shock法导入neo基因，获得了可育的转0基因植株，并且neo基因能稳定地遗传给后代。1993年Sukhapinda等用electric shock法转化从玉米花粉愈伤组织分离的原生质体，将gusA和nptⅡ转入原生质体，获得单倍体转化植株。1994年Laursen等以果胶降解酶处理悬浮细胞系后，通过electric shock法导入bar基因，也获得了可育的转0基因玉米。
电1击法操作简单，不受宿主限制，在遗传转化技术研究的初期得到了较为广泛的应用，但是它的转化效率较低，而且对有壁细胞或组织的转化效果较差。
典型的腺病毒载体系统如：穿梭质粒pCA13/腺病毒基因组质粒pBHG11/包装细胞293细胞。pCA13/的HCMV IE启动子－多克1隆位点－SV40 AN（poly A）构成外源基因的表达盒，该表达盒的插入使腺病毒E1基因缺失，但是保留其两端侧翼序列（左侧的1~3bp的ITR，右侧从3.5kb到末端的维持病毒装配和活力必须的蛋白IX的基因），也保留了腺病毒的包装信号
φ（194~358bp）；pBHG11则保留了腺病毒基因组的绝大部分，但是缺失了包装信号φ、0.5~3.7图距（mu）部分的E1区、77.5～86.2mu的E3区，293细胞是整合有Ad5 E1基因的人胚shen细胞系。pBHG11因为缺失包装信号及E1区而不能copy，pCA13带有包装信号及E1的侧翼序列，但是缺失E1区及腺病毒绝大部分基因组，同样不能copy。外源目的基因插入pCA13后，与pBHG11共转染，进入293细胞。pCA13与pBHG11在细胞内发生同源重组，同时，293细胞提供E1蛋白，从而包装产生腺病毒颗粒。该病毒的蛋白质外壳同野1生型腺病毒相似，具有同样的感1染力进入靶1细胞的能力，但是基因组DNA的E1区被外源目的基因取代，即进入靶1细胞后病毒不能copy，但可以表达目的蛋白。
腺病毒是如何构成的
病毒滴度滴定（组织培养半数感1染量TCID 50）：将分装好的病毒液接种一长满单层Hep-2细胞的96孔板，第yi列每孔加25μl病毒液，作1/lO 稀释，此后依次作倍比稀释，每稀释度接种8孔，zui后一列做阴性对照.对照孔和感1染病毒孔均加入100μl维持液，置37℃ 、5%CO2 培养箱中培养。每天观察并记录出现CPE的孔数及具体时间，待细胞病变不再发展后，观察记录结果，用Reed-Muench法计算病毒滴度TCID 50。
腺病毒的分类
分类及自上个世纪50年代发现并成功分离腺病毒以来，已陆续发现了100余个血1清型，其中人腺病毒有52种，分为A、B、C、D、E和F六个亚群（subgroup）。基因cure常用的人的2型及5型腺病毒在血1清学分类上均属C亚群，在DNA序列上有95%的同源性。二者的增殖能力非常强，滴度通常可以达到109pfu (plaque forming unit)/ml，其在单个细胞中的基因组拷贝数可达104（约占细胞总DNA的10%）。病毒颗粒比较稳定，通过CsCl梯度离心可以达到1010~1011pfu/ml，满足动物实验的要求。
（作者： 来源：）
