低温生物菌种——保存方法介紹
脱水存法
①沙土保存法,能产孢子的细菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合,经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2~3次,烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子,用无菌蒸馏水2~2.5ml制成孢子悬液,吸取少许加入沙土管中,经真空抽干,外观呈松散状态,于4℃冰箱保存,保存期可达5~7年。
② 冷冻
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低温生物菌种——保存方法介紹
脱水存法
①沙土保存法,能产孢子的细菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合,经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2~3次,烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子,用无菌蒸馏水2~2.5ml制成孢子悬液,吸取少许加入沙土管中,经真空抽干,外观呈松散状态,于4℃冰箱保存,保存期可达5~7年。
② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂(一般用脱脂牛奶)相混合,放在安瓿管内于-20~-30℃的乙醇浴中速冻。然后,在低温下用真空泵抽干,并用氧化磷或干冰使水汽结冻,熔封安瓿管,于低温下保存。保存期可达5~10年之久。
③ 石蜡油封存法,在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油,高出斜面1cm,于4℃冰箱或低温干燥处保存,此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物,保存期为一年以上。
低温生物菌种——常用菌种介绍
侧孢芽孢菌
在延迟期, 短芽孢菌为革兰氏染色阴性,菌体呈细长的杆状;在对数生长期,为革兰氏染色阳性,菌体成短而粗的杆状;在静止期,革兰氏染色又转为阴性,菌体成细长的杆状,偶尔也能观察到椭圆形的芽孢。图1是50号菌用1%H2SO4(pH6.8)负染后的电镜照片:菌体杆状、周生鞭毛、大小约0.88μm×2.2μm。
作为非脊椎动物的病原菌,有关研究人员曾报道了这种细菌的杀线虫能力,由于所报道的这些侧孢短芽孢菌菌株都不产生伴孢晶体,所以这些菌株的杀线虫毒力因子并非来自于具有特征性的伴孢晶体。然而,Smirnova TA,et al.分离到了2株能形成大的伴孢晶体的侧孢短芽孢菌菌株,这两株菌显示出很强的杀昆虫能力,研究证实,这种能力与菌体在形成芽孢过程中的伴孢晶体相关。有趣的是,Singer的实验表明,一株侧孢短芽孢菌的杀线活性源于一个热稳定蛋白的毒性。所有这些研究表明,不同侧孢短芽孢菌菌株拥有不同的线虫致病因子。牛秋红研究小组分离到的侧孢短芽孢菌G4菌株具有显著的杀线虫功能,但其并不产生伴孢晶体。从该菌株的发酵液里提取的粗蛋白酶液在12h内能杀掉所有测试线虫并在24h内完全降解。从侧孢短芽孢菌G4菌株中纯化出的丝氨酸胞外蛋白酶可水解多种底物,包括胶原和线虫体壁,具有很强的杀线虫能力,组织病理电镜实验证实这种蛋白酶严重破坏了线虫体壁。而且,蛋白酶将线虫体壁分解成为一些氨基酸或小肽,这些营养物使病原细菌更好的生长繁殖。该蛋白酶基因异源表达的菌株表现出了明显的杀线虫活性,重组蛋白酶在体外对线虫体壁降解,而蛋白酶缺失菌株丧失了大部分的杀线活性,死的线虫在生测中保持了完整的体壁,表明蛋白酶在线虫侵染中起主要作用。

生物菌种的特点
调节生命活动,增产增收:菌群中的胶冻样芽孢菌、侧孢芽孢菌、地衣芽孢菌等有益菌可促进作物根系生长,须根增多。有益微生物菌群代谢产生的植物内源酶和植物生长调节剂经由根系进入植物体内,促进叶片光合作用,调节营养元素往果实流动,膨果增产效果明显。与施用化肥相比,在等价投入的情况下可增产15%—30%。

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