细胞冻存步骤
1.用移液器吸走原培养基，加入适量PBS洗1-2遍;
2.加入适量胰酶，置于培养箱中消化;
3.待消化到位后加入适量血浆或完全培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min;
4.配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107 cells/mL，转移到冻存管中;
5.将冻存管放入程序降温盒
200-074-401冻存袋报价
细胞冻存步骤
1.用移液器吸走原培养基，加入适量PBS洗1-2遍;
2.加入适量胰酶，置于培养箱中消化;
3.待消化到位后加入适量血浆或完全培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min;
4.配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107 cells/mL，转移到冻存管中;
5.将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。
6.冻存细胞后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存，
为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存
冻存细胞的装置及方法
本发明的装置由细胞冻存袋;细胞冻存盒,细胞架组成,细胞冻存袋置于细胞架上,细胞架置于细胞冻存盒内.批量冻存细胞的方法:将细胞悬液装入细胞冻存袋中置于细胞架上,再将细胞架放入细胞冻存盒内;将细胞冻存盒投入液氮罐或-7O°C以下冷冻设备冷冻24小时,将细胞冻存袋取出投入液氮中或-70CI以下冷冻设备长期冻存,当需解冻细胞时,拉出细胞冻存袋放入38C-39C℃ 的温水中解冻当凝固物都融化为液体后移入无菌操作台,按无菌操作程序操作将细胞冻存袋中的细胞悬液分装入离心管中离心,弃上清液,按常规解冻细胞来操作.本发明的细胞冻存袋冻存细胞体积达50-200ml,整套装置直接投入液氮中或放入-70°C以下冷冻设备.
冻存袋使用注意事项
1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致。
2. 冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二亚砜（DMSO）对细胞不是完全，在常温下，二亚砜对细胞的毒副作 较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二亚砜（DMSO）选择进口产品。
3. 离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。
细胞冻存离心问题
目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除 DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了会受压过大， 。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液 体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。
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