细胞增殖是生活1细胞的重要生理功能之一,是生物体的重要生命特征。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。
越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测,关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。那么到目前为止,研究细胞增殖有哪些手段呢?
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿1瘤medicine效果的基础实验手段。准确的检测细胞增殖方法是BrdU
全血DNA纯化
细胞增殖是生活1细胞的重要生理功能之一,是生物体的重要生命特征。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。
越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测,关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。那么到目前为止,研究细胞增殖有哪些手段呢?
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿1瘤medicine效果的基础实验手段。准确的检测细胞增殖方法是BrdU法。而EdU法检测试剂盒是Brdu方法的革命性突破。EdU试剂盒是一种嘧1啶类似物,可以在DNA合成期整合入DNA双链。通过以上原理图的对比,大家不难发现,EdU法检测细胞增殖,无须抗1体,无变性步骤,保持细胞形态和DNA完整性,是一种简单,可靠,省事的方法。
【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】
① 按下表称取适量的新鲜植物材料(如选用的是冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品冷冻完全后、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。
植物材料使用量 植物花、叶片10~100 mg 植物茎60~240 mg 植物根80~240 mg 植物种子80~240 mg 如选取植物的根、种子等样品时,因其基因组DNA含量很低,需使用超过表格中所示的参数用量,此时请分两管进行步骤1~6的实验操作,在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤,使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。如从培养的植物细胞中提取基因组DNA,请离心收集2×103~1×107的培养植物细胞,加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中,加入液氮后、用力研磨至粉末状。
注)样品研磨应充分,否则将会严重影响基因组DNA的收率。
② 将研钵移至65℃水浴,当样品粉末刚开始融化时,向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1,用力碾磨30秒。
③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注)处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时,可延长水浴时间至60分钟。
PCR产物的回收(胶回收试剂盒)
1.胶回收的目的(1)去除非特异性扩增的产物(2)去除多余的底物(3)去除多余的Taq酶(4)得到目的片段
2.胶回收的过程(1)切胶:紫外下切胶,称重。之后用枪头将胶块捣碎。切胶的刀片建议选用一次性刀片,实验台等也尽可能用乙醇擦拭干净。可通过空EP管与装胶EP管质量的差值计算胶的质量。注意切胶时尽可能避免切到条带外的凝胶,且避免紫外时间过长。别忘记胶条有厚度,前后多余的部分也尽量切除。
(2)溶胶:每1 mg胶加入1 μL膜结合液(MB),按比例1:1加入MB,55℃水浴溶解。每1~2 min震荡混匀,待溶解后至少在水浴中保持1~2 min,保证胶块完全溶解。在电泳过程中,DNA会与大分子的多糖紧密结合,凝胶的种类和质量不同,DNA与之结合力也不同,只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放。否则,凝胶将与DNA一起沉淀下来,洗脱后将影响回收结果的纯度。(3)结合:将溶胶转移至纯化柱内,12000 rpm离心1 min,倒掉收集管中的废液,将纯化柱重新插回收集管中。胶块完全溶解后建议将胶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在温度较高时结合DNA的能力较弱。
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